1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 临床资料
连续收集胃镜下活检组织,由有经验的消化科医师在胃镜下取材,同时进行组织学检查,依据组织学检查结果收集浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃溃疡各40例,取健康成年人并经病理检查无炎症活动及Hp感染的正常胃黏膜25例。其中男78例,女62例。年龄19~72岁,平均年龄41岁。所有受试者在检查前2周内未服用过质子泵抑制剂、铋剂及抗生素,无服用其他药物史,肝肾功能均正常。慢性胃炎在炎症明显处和胃窦、胃体各取材1块,胃溃疡在其边缘和胃窦、胃体各取材1块,立即投入40g/L多聚甲醛中固定。
1.1.2 Hp根治治疗
方案为奥美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、替硝唑1.0g,均每天2次,疗程7d。停药4周后复查14C呼气试验,阴性者判定为Hp根除,并同时采集胃黏膜组织做MIF检测。
1.1.3 试剂
兔抗人MIF多克隆抗体购自美国Santa Cruze公司,SP9001免疫组织化学染色试剂盒及DAB显色试剂盒购自广州中杉金桥,Warthinstarry银染色试剂为实验室自配。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学法
PBS代替一抗做阴性对照,已经确诊的肺腺癌做阳性对照,将甲醛固定的组织经过常规脱水、浸蜡、包埋后切片,厚度为4μm,切片经常规脱蜡水化,高压抗原修复,加100mL/L H2O2以灭活内源性过氧化物酶,加封闭用正常山羊血清工作液,加一抗(浓度1∶400),于4℃冰箱中过夜,加生物素标记山羊抗兔IgG,加辣根酶标记链霉卵白素工作液,DAB显色剂显色,苏木素复染,MIF在细胞浆中表达,阳性呈棕黄色。
1.2.2 结果判断
参照AXIOTIS等[4]标准,由两位病理医生采用盲法(独立检测) 在高倍镜(×400)下读片。每张切片随机观察10个不重复的视野(不足10个视野的,按实际观察到的视野计数),根据阳性细胞占同类细胞总数的百分率及细胞染色强度综合判定。染色强度评分标准:不着色为0分,浅粉色或黄色为1分,粉色或棕黄色为2分,红色或黄褐色为3分。阳性细胞所占整张片比例评分标准:阳性细胞数<10%为0分,10%~40%为1分,41%~70%为2分,>70%为3分。两种评分相加,0~1分为(-),2分为弱阳性(+),3~4分为阳性(),5~6分为强阳性()。≤2分的定为阴性,>2分的定为阳性医.学全.在.线www.med126.com。
1.2.3 Warthinstarry银染色法检测Hp
切片经常规脱蜡至水,放入10g/L AgNO3水溶液,60℃避光浸染60min,完成染色后倾去浸银液,用双蒸水涮洗。显影工作液配制后即刻(1min内)倒入装有切片的玻璃皿中,室温下避光染色2~4min,显影至切片组织呈棕褐色,立即弃去显影液,流水冲洗停止显影过程,切片常规脱水至透明,光学树脂封片,Hp在镜下可见在金黄色的组织背景中,呈清晰黑色短棒状或S状。
1.3 统计学处理
实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行处理,各组间对照采用四格表资料的Pearson卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MIF表达与病理分型的关系
MIF表达部位位于细胞浆,染成黄色或棕黄色,在25例Hp阴性的正常胃黏膜组织中有仅有2例MIF呈阳性表达,阳性表达率为8%;在40例Hp感染的浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃溃疡黏膜组织中分别有12 例、26例和19例阳性表达,阳性表达率分别为30%、65%和47.5%,幽门螺杆菌阳性病变组MIF表达显著高于阴性正常组,差异有显著性(2/25 vs. 57/120;χ2=13.376, P<0.01);在慢性胃炎中,萎缩性胃炎MIF表达显著高于浅表性胃炎(12/40 vs. 26/40;χ2=9.825, P<0.01),说明炎症程度加重,MIF表达增强,在胃溃疡组织中,除了胃黏膜上皮细胞外,大量浸润的炎性细胞中也高表达MIF(图1~图3、表1)。表1 胃病理分型与MIF蛋白表达的关系(略)
2.2 MIF的表达与Hp根治的关系