| 公开(公告)号 | CN1273601C |
| 公开(公告)日 | 2006.09.06 |
| 申请(专利)号 | CN200410039594.3 |
| 申请日期 | 2004.02.19 |
| 专利名称 | 一种高效筛选目的蛋白的表达载体，其制备方法及用途 |
| 主分类号 | C12N15/64(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/64(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C07K16/00(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
| 发明(设计)人 | 陈立勇;解志刚;郭 宁;沈倍奋 |
| 地址 | 100850北京市海淀区太平路27号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种真核表达载体，该载体是以PCI-neo为基础改构获得，其特征在于：①该载体中neo基因被置换为dhfr基因；②在CMVI.E.启动子后连入的是记载于GENBANK登录号为A22466和A22467的anti-c-erbB2-scFv基因及人抗体基因IgGlFc段基因；③IgGlFc段基因之后连入白细胞介素2基因，抗体基因和IL-2基因一起构成融合基因；④融合基因后面连入内部核糖体进入位点IRES序列和第546位鸟嘌呤突变为胸腺嘧啶的突变Neo基因；⑤该双顺反子表达载体被命名为pCMV-HFI-mNeo。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种高效筛选目的蛋白的表达载体，其制备方法及用途。发明人通过在含有CMV启动子和dhfr扩增系统的真核表达载体中引入一个内部核糖体进入位点，将anti-erbB2-scFv-Fc基因与IL-2的融合基因与新霉素抗性基因连接。利用PCR方法对Neo基因进行点突变，构建成表达载体pCMV-HFI-mNeo。本载体特点在于通过引入IRES使融合蛋白基因和Neo基因在同一个启动子启动下共表达；通过对Neo基因的点突变弱化Neo基因表达产物活性，从而提高了阳性表达克隆的筛选效率，大大减少了筛选工作量，获得了目的基因的稳定高效表达克隆。 |
| 国际公布 |
