公开(公告)号 | CN1273585C |
公开(公告)日 | 2006.09.06 |
申请(专利)号 | CN200410089167.6 |
申请日期 | 2004.11.29 |
专利名称 | 细胞色素 P450BM-3 单加氧酶变体基因及其用途 |
主分类号 | C12N9/02(2006.01)I |
分类号 | C12N9/02(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;C12P17/10(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 浙江大学 |
发明(设计)人 | 梅乐和;李红梅;姚善泾 |
地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
代理人 | 张法高 |
国省代码 | 浙江;33 |
主权项 | 一种细胞色素P450BM-3单加氧酶变体基因,其特征在于:通过易错PCR技术介导的随机突变,筛选获得的P450BM-3变体基因,该P450BM-3基因中的第168位的天冬氨酸的密码子GAT突变为天冬酰胺的密码子AAT,第225位的丙氨酸的密码子GCA突变为缬氨酸的密码子GTA,将第440位赖氨酸Lys的密码子AAA突变为天冬酰胺Asn的密码子AAT所得到的P450BM-3变体基因,该变体基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1,并且编码细胞色素P450BM-3的单加氧酶。 |
摘要 | 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3单加氧酶变体基因及其用途。它通过易错PCR技术介导的随机突变,筛选获得的P450BM-3变体基因,该P450BM-3基因中的第168位的天冬氨酸的密码子GAT突变为天冬酰胺的密码子AAT,第225位的丙氨酸的密码子GCA突变为缬氨酸的密码子GTA,将第440位赖氨酸的密码子AAA突变为天冬酰胺密码子AAT所得到的P450BM-3变体基因(Asp168→Asn,Ala225→Val,Lys440→Asn)P450BM-3。该变体基因序列为SEQ ID No.1核苷酸序列,并且编码细胞色素P450BM-3的单加氧酶。本发明创造了一种对吲哚具有更高催化活力的P450BM-3变体基因,该变体基因表达的突变酶能构催化吲哚生成染料靛蓝,与R.D.Schmid领导的科研小组获得的具有三个突变位点的P450BM-3(Phe87Val,Leul88Gln,Ala74Gly)变体酶相比较,在测定的一例中活性提高了1.9-2.4倍,为生物转化生产染料靛蓝提供了广阔的应用前景。 |
国际公布 |