| 公开(公告)号 | CN1276086C |
| 公开(公告)日 | 2006.09.20 |
| 申请(专利)号 | CN03142232.2 |
| 申请日期 | 2003.08.13 |
| 专利名称 | 一类双链RNA分子及其在制备抑制乙型肝炎病毒复制药物中的应用 |
| 主分类号 | C12N15/70(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/70(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 复旦大学;上海恒达科技发展股份有限公司 |
| 发明(设计)人 | 钱志康;宣宝琴;徐剑锋;李 琳;闵太善;程小伟;史顺成;黄伟达 |
| 地址 | 200433上海市邯郸路220号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海正旦专利代理有限公司 |
| 代理人 | 陆 飞 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种利用大肠杆菌发酵制备RNAi用ldsRNA和siRNA分子的方法，其特征在于包括构建ldsRNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱-SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物；该混合物用CF-11柱进行纯化得到ldsRNA，并利用大肠杆菌RNaseIII将ldsRNA切成12-30bp的siRNA；其中，构建在大肠杆菌中表达长链dsRNA的表达载体的步骤如下：(1)将目的基因片段以相反的方向将基因的3’端连接到第三段DNA片段的两侧，然后克隆到带有一个T7启动子的载体中去，当把此表达质粒转化到能表达T7RNA聚合酶的宿主菌内后，目的基因的正反两个方向的DNA链以及两者之间的第三段DNA链就能被依次转录，成为一条连续的RNA链；或者(2)利用带有大肠杆菌复制起点的表达载体，在合适的位置加入抗性基因和多克隆位点，并在多克隆位点两侧分别加入相对的两个启动子以及终止子，当在多克隆位点中插入目的DNA片段后就可以以正反两个方向转录RNA；上述步骤中，所选的目的基因为乙肝病毒基因组中的任何片段。 |
| 摘要 | 本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种利用大肠杆菌发酵制备RNA干扰用双链RNA分子或小干扰RNA分子的方法，并将这些RNA分子用于制备治疗乙型肝炎的药物。将本发明得到的ldsRNA或siRNA以适当的比例与乙型肝炎病毒表达载体混合，并用尾静脉液压法注射到小鼠体内。结果显示非同源性序列ldsRNA和siRNA基本不抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的复制，而与乙肝病毒基因同源性的ldsRNA和siRNA可以有效抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的感染复制，抑制率高达90％以上。 |
| 国际公布 |
