方法名称： |
西藏红豆杉—紫杉醇的含量测定—HPLC-DAD |
应用范围： |
用于西藏红豆杉不同部位中紫杉醇的含量测定 |
方法原理： |
本品粉末用甲醇超声提取，浓缩，三氯甲烷提取后，经液相色谱仪分离，在230nm处测定，按外标法计算含量。 |
仪器设备及实验条件： |
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仪器设备 Agilent1100高效液相色谱仪(高压二元泵、恒温柱温箱、 DAD检测器、手动进样器、在线脱气机)。 | 色谱条件 色谱柱：Aphenomenexluna C18 柱 ( 250×4.60mm i.d，5um) ；柱温:30 ℃；流动相：甲醇-水 (60∶40) ；流量：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样量: 10μL。 |
试样制备： |
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对照品溶液的制备 精密称取紫杉醇标准品1.00mg，定容于1ml甲醇中，稀释得 0.100mg·ml-1浓度的甲醇溶液。 | 供试品溶液的制备 精密称取样品 2.0g，置于圆底烧瓶中，加入甲醇 20ml，置于超声清洗器中于50℃超声振荡提取60分钟，甲醇液过滤，滤渣和滤纸复加20ml 甲醇，在相同条件下超声提取4分钟，再次过滤后，滤渣和滤纸再加20ml甲醇，在相同条件下超声提取20分钟，合并滤液，减压蒸干后，残渣加30ml氯仿，超声振荡30分钟，过滤，取氯仿层，回收氯仿，于残渣中加少许甲醇，超声萃取，甲醇液离心，上层清液以甲醇定容至1ml 。叶提取物经自制氧化铝柱，用氯仿洗脱非极性成分后，甲醇洗脱，浓缩，以甲醇定容至1ml，定容后的甲醇液经 0.45μNelon滤膜过滤，滤液供 HPLC分析用。 |
操作步骤： |
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，依上述色谱条件测定，按外标法计算含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
林鹏程，高东红，马孝贤.西藏红豆杉不同部位紫杉醇含量的分布研究.青海师专学报(教育科学) .2003，（6)：87～88 |
