公开(公告)号 | CN1546168A |
公开(公告)日 | 2004.11.17 |
申请(专利)号 | CN200310115937.5 |
申请日期 | 2003.12.16 |
专利名称 | 脂质体内皮抑素的制备方法 |
主分类号 | A61K38/17 |
分类号 | A61K38/17;A61K47/24;A61K9/12;A61P35/00 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
发明(设计)人 | 王群 |
地址 | 130022吉林省长春市人民大街5625号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | |
代理人 | |
国省代码 | 吉林;22 |
主权项 | 一种脂质体内皮抑素的制备方法,将溶于氯仿的磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂酰丝氨酸和硬脂酸胺按摩尔比为15~20∶15~20∶2~5∶0.5~1.5混合,在36~40℃下减压旋转蒸发4~6h,旋转速度为80~120rpm,形成一薄层脂膜,以氮气流除尽残余痕量有机溶剂,加入2mLH2O继续以120rpm旋转溶解下脂膜,在20~25℃下浴式超声10~15min,形成多囊脂质体,室温下静置孵育1~2h,冰浴下进行探针超声,6~10×0.5min,每次间隔0.5~1min,悬液静置孵育2~3h,8000rpm离心10min,取上清液小单层脂质体,以0.22μm膜除菌过滤后,同4mg/mL内皮抑素溶液等体积混合,内皮抑素是通过基因工程方法在大肠杆菌中表达并经Ni-NTASepharose亲和层析柱纯化的重组人内皮抑素蛋白,加入脂质体冻干保护剂,冻干保护剂为6~8%海藻糖、0.6~0.8%明胶、0.5-1%人血清白蛋白、1.5~2%山梨醇、1%谷氨酸钠、1%尿素、0.5%抗坏血酸和0.2%L-精氨酸,在-45℃冷冻干燥8~10h,收获内皮抑素脂质体。 |
摘要 | 本发明属于脂质体内皮抑素的制备方法。结合旋转蒸发和冷冻干燥方法制备的内皮抑素脂质体粒径大小在150nm~180nm,蛋白包裹率是35~42%。在冻干状态下,内皮抑素脂质体在-20℃可以保存12个月,在4~8℃可以保存6个月,在20~25℃可以保存2个月。在内皮抑素脂质体重新水合形成胶体溶液时,在4~8℃稳定期为6d,在20~25℃稳定期为60h。该脂质体具有稳定性好、蛋白包裹率高、粒径大小均匀、操作简单、适合工业化大批量生产的优点。 |
国际公布 |