| 公开(公告)号 | CN1546671A |
| 公开(公告)日 | 2004.11.17 |
| 申请(专利)号 | CN200310115938.X |
| 申请日期 | 2003.12.16 |
| 专利名称 | 重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术 |
| 主分类号 | C12N15/70 |
| 分类号 | C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02;//(C12N15/70,C12R1∶19) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 发明(设计)人 | 王群 |
| 地址 | 130022吉林省长春市人民大街5625号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术，将重组质粒pBendo转化表达型宿主菌E.coliBL21(DE3)中，筛选出阳性重组菌E.coliBL21-Endo，接种于2mL、含60～90μg/mL卡那霉素的LB培养液中，在细菌培养箱中，35～38℃，180～220rpm振荡培养12～16h，然后将菌液接种于200mL、含60～90μg/mLKan的LB培养液中，36～38℃，200～250rpm振荡培养2～3h，使菌液OD600nm在0.4～0.6，向菌液中加入终浓度为0.8～1.0mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，在36～37℃下，180～200rpm继续振荡培养3～5h诱导内皮抑素的表达，表达量达到菌体总蛋白的38％。 |
| 摘要 | 本发明属于重组人内皮抑素在大肠杆菌中高效表达的技术领域。将人内皮抑素基因其插入原核表达载体pET28b中构建重组表达质粒pBendo，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)中，筛选出阳性重组菌E.coli BL21-Endo，在含卡那霉素的LB培养液中振荡培养，使菌液OD600nm在0.4～0.6，加入终浓度为0.8～1.0m mol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，继续振荡培养诱导内皮抑素的表达。重组内皮抑素蛋白表达量提高到菌体总蛋白的38％。 |
| 国际公布 |
