| 公开(公告)号 | CN1204145C |
| 公开(公告)日 | 2005.06.01 |
| 申请(专利)号 | CN00123041.7 |
| 申请日期 | 2000.09.29 |
| 专利名称 | 人血管内皮细胞生成抑制因子的制备工艺及其制品在抗肿瘤血管生成治疗中的应用 |
| 主分类号 | C07K14/475 |
| 分类号 | C07K14/475;C12N15/11;C12P21/00;A61P35/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 辽宁卫星生物制品研究所(有限公司) |
| 发明(设计)人 | 李忠义;陈林生;刘江秋;孙亦红;汪军远 |
| 地址 | 110044 辽宁省沈阳市大东区东站街51甲3 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 沈阳智龙专利事务所 |
| 代理人 | 孙吉秀 |
| 国省代码 | 辽宁;21 |
| 主权项 | 一种人血管内皮细胞生成抑制因子—Endostatin的制备工艺，是经过基因克隆、酵母菌发酵和纯化过程制备而得，其步骤如下：a.通过PCR方法从人胎儿肾脏细胞cDNA文库中筛选得到人胶原蛋白十八--humantypeXVIIIcollagen基因1503至2055cDNA活性片段，首先制备两种引物分别为CTCGAGAAAAGAGAGGCTCACAGCCAC和GCGGCCGCTTACTACTTGGAGGCAGTC，以人胎儿肾脏细胞cDNA库为模板，以PCR条件94℃2分钟、55℃2分钟和72℃2分钟共做30个循环而得到人血管内皮细胞生成抑制因子—Endostatin的基因片段；b.将该基因克隆入TAVectohk质粒中，通过XhoI，NotI两种内切酶酶切，经电泳纯化得到的基因片段，再克隆入pPICZαA质粒中的上述两种内切酶位点中；c.将该基因载体pPICZαA质粒转染于酵母菌中，经筛选得到高效基因工程酵母菌株；d.经发酵诱导表达的菌液采用超滤、浓缩、高速离心、亲和柱层析及凝胶过滤等手段纯化而得到人重组血管内皮细胞生成抑制因子蛋白质；e.将纯化得到的人重组血管内皮细胞生成抑制因子Endostatin蛋白加入到含有bFGF的牛肾上腺毛细血管内皮细胞培养液中，培养3天后通过细胞计数和细胞染色方法，测定抑制毛细血管内皮细胞增殖的活性。 |
| 摘要 | 本发明属于基因工程领域，涉及一种人重组血管内皮细胞生成抑制因子的制备方法及其制品在抗肿瘤血管生成治疗中的应用，它是通过PCR方法从人胎儿肾脏细胞cDNA文库中筛选得到的基因片段，通过基因克隆方法在酵母菌中发酵、表达、及纯化过程得到纯品，其具有高效表达、可溶性、无需复性、修饰及糖基化的特性，能抑制肿瘤血管内皮细胞增殖，对多种肿瘤具有治疗作用。 |
| 国际公布 |
