公开(公告)号 | CN1250739C |
公开(公告)日 | 2006.04.12 |
申请(专利)号 | CN01120369.2 |
申请日期 | 2001.08.23 |
专利名称 | 低成瘾性镇痛药物高通量筛选平台 |
主分类号 | C12Q1/04(2006.01)I |
分类号 | C12Q1/04(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 |
发明(设计)人 | 段海清;张兆山 |
地址 | 100071北京市丰台区东大街20号国家生物医学分析中心 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 北京纪凯知识产权代理有限公司 |
代理人 | 关 畅 |
国省代码 | 北京;11 |
主权项 | 一种低成瘾性镇痛药物的高通量筛选方法,包括以下步骤: 1)将无血清微载体培养的CHO衍生工程细胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程细胞株CHO-PCGMCC№0612分别装入层析柱中,得到CHO-OPR8层析柱及CHO-P层析柱;所述微载体培养是在培养基中加入了2-20mg/ml的大孔径明胶微载体; 2)将待选择的5肽库和15肽库分别上样到CHO-OPR8层析柱,洗涤层析柱后采用洗脱液洗脱与CHO-OPR8特异结合的样品,将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱,收集穿过峰,得到第一轮筛选出的候选多肽; 3)将第一轮筛选出的候选多肽再上样到CHO-OPR8层析柱,将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱,收集穿过峰,得到第二轮筛选出的候选多肽; 4)将第二轮筛选出的候选多肽再上样到CHO-OPR8层析柱,将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱,收集穿过峰,得到第三轮筛选出的候选多肽; 5)将最后一轮筛选的噬菌体全部转染K91Kan,挑选阳性菌株进行接种培养,提取质粒,进行序列分析; 6)将复制型噬菌体质粒的序列分析结果与空载体的序列进行比较,寻找插入片段的核苷酸序列,推导出氨基酸序列,并将序列进行一级结构的比较和二级结构的分析,得到目的多肽。 |
摘要 | 本发明公开了一个低成瘾性镇痛药物高通量筛选平台。低成瘾性镇痛药物的高通量筛选方法包括以下步骤:1)将细胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分别装入层析柱中,得到CHO-OPR8层析柱及CHO-P层析柱;2)将待选择的5肽库和15肽库分别上样到CHO-OPR8层析柱,将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱,收集穿过峰,得到第一轮筛选出的候选多肽;3)第二轮洗涤;4)第三轮洗涤;5)将最后一轮筛选的噬菌体全部转染K91Kan,挑选阳性菌株进行接种培养,提取质粒,进行序列分析;6)将复制型噬菌体质粒的序列分析结果与空载体进行比较,寻找插入片段的核苷酸序列,推导出氨基酸序列,得到目的多肽。 |
国际公布 |