融合型幽门螺杆菌粘附素基因工程疫苗的制备方法

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公开(公告)号	CN1255542C
公开(公告)日	2006.05.10
申请(专利)号	CN200410022186.7
申请日期	2004.03.29
专利名称	融合型幽门螺杆菌粘附素基因工程疫苗的制备方法
主分类号	C12N15/62(2006.01)I
分类号	C12N15/62(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P1/04(2006.01)N;A61P31/04(2006.01)N
分案原申请号
优先权
申请(专利权)人	中国人民解放军第三军医大学
发明(设计)人	邹全明;刘正祥;洪愉;朱永红;童文德;解庆华
地址	400038重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号
颁证日
国际申请
进入国家日期
专利代理机构	重庆华科专利事务所
代理人	康海燕
国省代码	重庆;85
主权项	一种融合型幽门螺杆菌粘附素基因工程疫苗的制备方法，其特征在于：首先克隆LTB或CTB、HpaA基因，克隆LTB、CTB、HpaA基因的引物为： LTBP15’-ccatggctccccagtctattacag-3’(NcoI) P25’-ggatcctgcggcgcgtagttttccatactgattgccg-3’(BamHI) CTBP35’-cccatgggatgattaaattaaaatttg-3’(NcoI) P45’-cgggatcctgcggcgcgtaaacggtatgattaacgc-3’(BamHI) HpaAP55’-ggatcctacgaatgaagtcgctttgaaat-3’(BamHI) P65’-ctcgagtcggtttcttttgcc-3’(XhoI) 下划线部分为酶切位点；在上游基因LTB和CTB的3’端，即在引物P2和P4上设计linker序列，连接LTB和HpaA，或CTB和HpaA，构建LTB-HpaA或CTB-HpaA融合表达载体和高效表达菌株；然后，用发酵方式高密度表达融合蛋白；最后，采用包涵体提取，复性，离子交换层析、凝胶过滤层析纯化技术的顺序组合，大量获得LTB-HpaA或CTB-HpaA，并将该疫苗分别制备成口服剂、注射剂及滴/喷鼻剂。
摘要	本发明公开了融合型幽门螺杆菌粘附素基因工程菌疫苗的构建及其制备方法，其特征在于用粘附素HpaA通过基因重组方法构建幽门螺杆菌粘附素与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位或霍乱毒素B亚单位分子内佐剂融合工程菌，经过高密度发酵、包涵体提取、复性及纯化大量获得所需疫苗蛋白，该疫苗可以分别被制备成口服剂、注射剂及滴/喷鼻剂。该基因工程疫苗构建方法独特，制备工艺简捷、容易放大、重复性好，所获疫苗蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的免疫应答和免疫保护作用。
国际公布