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一种利用甲醇酵母系统高效表达tPA等外源蛋白的方法及其表达产物的纯化制备技术

公开(公告)号 CN1757745A  
公开(公告)日 2006.04.12  
申请(专利)号 CN200410017881.4  
申请日期 2004.04.23  
专利名称 一种利用甲醇酵母系统高效表达tPA等外源蛋白的方法及其表达产物的纯化制备技术  
主分类号 C12P21/00(2006.01)I  
分类号 C12P21/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 黄秀东;唐德江  
发明(设计)人 黄秀东;李树刚;于廷和  
地址 201206上海市浦东新区碧云路333弄中天碧云苑18号603室  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 重庆市恒信专利代理有限公司  
代理人 刘小红  
国省代码 上海;31  
主权项 一种通过基因工程菌株制备一大类目的蛋白或多肽的方法,通过此方法表达出的蛋白质具有CP-LS-CS-IP样的特征性结构, 其中CP-代表伴侣蛋白(CP-,ChaperonProtein) LS-指连接肽的序列(LS-,LinkerSquence) CS-是蛋白酶法或化学法切割时的识别肽段序列(CS-,CleavageSquence) IP-表示目的蛋白或多肽(IP,InterestofProtein/Peptide)。  
摘要 本发明涉及一种甲醇酵母通用表达载体PICZa-DoI的构建,其关键是可以利用该表达系统以融合蛋白的方式生产一类常规方法难以高水平表达的外源重组蛋白。采用此表达系统已经成功的表达了突变型人组织纤溶酶原激活物(rPA)、人膜联蛋白V-尿激酶活性片段融合蛋白(Anx-scUK)和突变型人神经生长因子(mut-hNGF)等。该表达系统的产生的融合蛋白可以通过螯合层析(Chelating Sepharose FF)介质从发酵液中直接捕获,经过脱盐、酶切或化学切割开融合蛋白,再用常规的层析介质就可以纯化制备出纯度合乎要求的目的蛋白作为医药用途。  
国际公布  
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