黄柏-小檗碱与黄柏碱的含量测定方法-HPLC-UV

本品细粉加1%醋酸-甲醇溶液水浴回流提取，经液相色谱分离，分别在284nm和345nm处测定峰面积，按外标法计算含量。

仪器设备  HP1100 Series 高效液相色谱仪；HP G1315A二极管阵列检测器；HP Chem Station 4.0 色谱工作站。

色谱条件  Merck-Lichrospher RP-C18色谱柱 (250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.3%磷酸二乙胺梯度洗脱{15/85（0～10min)；35/65（10～25min)}，检测波长：284nm（用于检测黄柏碱)；345 nm（用于检测小檗碱)；流速：0.8ml·min - 1；柱温：25℃。

对照品溶液的制备  精密称取黄柏碱、小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并定容，分别制成浓度为黄柏碱128μg·mL-1，小檗碱408μg·mL-1 的溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液各1mL，置2mL 容量瓶中，充分混匀，制成对照品混和溶液，即得。

供试品溶液的制备  取黄柏药材粉末约0.5g，精密称定，加1%醋酸-甲醇溶液30ml，称重，水浴回流提取2次，每次1h，冷却后称重，加溶剂补足重量，过滤，合并滤液，水浴蒸干溶剂，残渣以甲醇溶解并定容至10ml，即得。