方法名称： |
三妙丸－掌叶防己碱含量的测定－高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用HPLC法测定三妙丸中小檗碱的含量。 |
方法原理： |
将原药中的有效成分提取后，所得溶液采用毛细管GC法进行测定，所得图谱与对照品图谱进行对比分析，记录其响应值，采用标准曲线法计算三妙丸中掌叶防己碱的含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（分析纯) 2. 盐酸掌叶防己碱对照品（中国药科大学) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪－Waters510泵（Waters公司) Nova－PakC18柱（4μm，3.9mm×15mm) 1.2 Waters U6K进样器 1.3 Shimadzu Libror AEL－40SM精密（十万分之一)天平 2色谱条件 2.1流动相：乙腈－水＝1：1（1000mL含磷酸二氢钾3.4g及十二烷基硫酸钠1.7g) 2.2检测波长：345nm 2.3柱温：室温 2.4 流量：0.9mL/min |
试样制备： |
1 供试品的制备 取成药适量，精密称重，置10mL具塞离心管内，加5mL甲醇超声提取15min，离心（3000r/min)5min，倾取上清液，过滤。重复操作3次，合并滤液，滤纸及残渣用甲醇清洗，过滤，并入上清液，定容至25mL，用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液，待用。 2 对照品溶液的配制 精密称取盐酸掌叶防己碱对照品10.45mg，用甲醇定容至100mL，作为储备液。精密量取上述储备液1mL，甲醇定容至25mL，作为对照品溶液待用。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液1、2、5、6、10、18、30、40μL进样，按前述色谱条件测定峰面积，以进样量X（μg)为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取上述供试品溶液5μL注入高效液相色谱仪，按前述色谱条件测定峰面积，用标准曲线法计算样品中掌叶防己碱含量。 |
参考文献： |
潘杨,王天山，马国祥等. HPLC法测定成药二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黄丸中小檗碱、掌叶防己碱和药根碱的含量.中草药，1997，（3)：142-144. |
