方法名称： |
黄连上清丸－小檗碱的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
将供试品加盐酸-甲醇水浴加热，超声提取，离心，上清液制成供试液。点样、展开，薄层扫描仪用荧光扫描法进行扫描，于波长λ=366nm测量小檗碱的吸收度积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 苯 2.甲醇 3.醋酸乙酯 4.盐酸 5.异丙醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 超声清洗器 1.2 薄层扫描仪 1.3涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.4点样器 一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 1.5展开室 可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部双槽，盖子须密闭。 2材料 2.1玻板 用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40µm。 |
试样制备： |
1. 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。 2. 供试品溶液的制备 取本品1丸，切碎，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1:10)10mL，称定重量，置50℃热水浴中加热15分钟，放冷，超声提取30分钟，放冷，称重，补足减失重量，离心，取上清液作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2.点样 精密吸取供试品溶液1µL、对照品溶液1µL，分别交叉点于硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6:3:1.5:1.5:0.3)10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，双槽展开,氨蒸气饱和15分钟，展开至8～15cm时，取出薄层板，晾干。 4.标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法展开、扫描，测定斑点荧光强度积分值，以对照品溶液进样量对斑点面积积分值绘制标准曲线，进行线性回归，获得回归方程。 5.含量测定 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用荧光扫描法，波长：λ=366nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。 用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。 |
参考文献： |
杨霞,李振国,张同领.黄连上清丸中小檗碱的含量测定.中国药事,2000，14(1):38-42. |
