方法名称： |
注射用双黄连（冻干)—连翘甙的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定注射用双黄连（冻干)中连翘甙的含量。 本方法适用于中药制剂注射用双黄连（冻干)。 |
方法原理： |
供试品于分液漏斗中，加水溶解，以氯仿提取，收集氯仿液，水浴浓缩至干，残渣加甲醇溶解定容，过滤，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长276nm处检测连翘甙的吸收值，计算出其含量。 |
试剂： |
1.甲醇（色谱纯) 2. 冰乙酸 3. 氯仿 |
仪器设备： |
1. 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 YMG C18色谱柱（200×4.6mm，5μm)，理论塔板数以连翘甙峰计算不低于1000。 1.3 紫外吸收检测器 2. 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 水 冰乙酸 = 40 60 1 2.2 检测波长：276nm 2.3柱温：室温 |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品粉末（过五号筛-80目)试样60.0mg。 2. 对照品溶液的制备 精密称取连翘甙对照品适量，用甲醇溶解并稀释成每1mL含0.1mg连翘苷的对照品溶液。 3.供试品溶液的制备 将供试品置分液漏斗中，加水20mL使溶解，以氯仿提取4次（20，10，20，10mL)，收集氯仿液，水浴浓缩至干，残渣以甲醇溶解，并定量转移至25mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线绘制 精密吸取上述对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16.0，25.0μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长276nm处测定连翘甙的吸收值，以进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长276nm处测定连翘甙的吸收值，计算出其含量。 |
参考文献： |
郭淑敏，胡丽君，张丽敏等. 高效液相色谱法测定注射用双黄连中连翘甙的含量. 中国中医药科技，1997，4（2)：93-94. |
