注射用双黄连(冻干)—绿原酸和咖啡酸的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定注射用双黄连（冻干)中绿原酸和咖啡酸的含量。

本方法适用于中药制剂注射用双黄连（冻干)。

供试品于容量瓶中，用含内标物的流动相溶液溶解定容，过滤，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长274nm处检测绿原酸和咖啡酸的吸收值，计算出其含量。

1.甲醇（色谱纯)

2 .醋酸

3. 磷酸氢二钠

4 .水杨酸

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

ERC-ODS-1161色谱柱（100×6mm)。

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 10%磷酸氢二钠的醋酸缓冲液（取磷酸氢二钠1.43g，加入醋酸4.58mL后，用水稀释至1000mL，即得pH=2.7的磷酸氢二钠的醋酸缓冲液)= 10 90

2.2 内标物：水杨酸

2.3 检测波长：274nm

2.4柱温：55℃

1. 称取供试品

精密称取本品粉末（过五号筛-80目)试样10mg。

2. 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸和咖啡酸各10mg，分别于100mL量瓶中，用甲醇溶解定容，即配成100mg/L的标准溶液，作为对照品储备溶液。

3. 标准溶液的制备

取绿原酸的储备液，用甲醇稀释100倍，配成浓度为1mg/L的溶液，然后分别取稀释液0.1，0.5，1，2mL，减压下挥去溶媒，加入含有内标物的流动相1mL，充分溶解后作为绿原酸的标准溶液。

另取咖啡酸的储备液，用甲醇稀释200倍，配成浓度为0.5mg/L的溶液，然后分别取稀释液0.4， 1，2，4mL，减压下挥去溶媒，加入含有内标物的流动相1mL，充分溶解后作为咖啡酸的标准溶液。

4.供试品溶液的制备

将供试品置于10mL容量瓶中，用含内标物的流动相溶液溶解并稀释至刻度，过滤，取续滤液为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1. 标准曲线绘制

精密吸取上述标准溶液20μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处测定绿原酸和咖啡酸的吸收值，以标准溶液浓度对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

精密吸取上述供试品溶液20μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处测定绿原酸和咖啡酸的吸收值，计算出其含量。

何心，石春伟，芦秋萍等. 高效液相色谱法测定双黄连粉针中绿原酸和咖啡酸的含量. 药物分析杂志，1997，17（6)：410-411.