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人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途

公开(公告)号 CN101148661A  
公开(公告)日 2008.03.26  
申请(专利)号 CN200610127387.2  
申请日期 2006.09.18  
专利名称 人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途  
主分类号 C12N15/09(2006.01)I  
分类号 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国医学科学院基础医学研究所  
发明(设计)人 许雪梅;许于飞;张洪涛;宋国兴;司静懿;刘世德  
地址 100005北京市东单三条5号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限公司  
代理人 程 伟  
国省代码 北京;11  
主权项 一种病毒样颗粒,其特征在于该病毒样颗粒由选自序列为SEQ ID N0.1的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或核苷酸序列为SEQ ID NO.2的HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因所编码,该病毒样颗粒由下列步骤获得: 1)使用pFastBacDual-HPV16L1N、pFastBacDual-HPV16L1N/L2或pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK63linkB重组质粒分别转化感受态大肠杆菌DH10Bac; 2)筛选鉴定获得分别重组有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组Bacmid; 3)将所述重组Bacmid转染对数生长期的昆虫细胞,转染后收集上清,获得含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒; 4)用所述含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒感染对数生长期的Sf9昆虫细胞,使重组杆状病毒在感染细胞内分别表达导入的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63基因; 5)裂解感染有含HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒的细胞,纯化获得HPV16L1NVLPs、HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合病毒样颗粒。  
摘要 本发明涉及人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒,及其生产方法和用途,在生产中使用了对N端改造的主要衣壳蛋白基因和C末端融合改造的大肠杆菌热不稳定肠毒素LTK63的次要衣壳蛋白L2融合基因;在杆状病毒一昆虫细胞表达体系中生产L1NVLPs、L1N/L2VLPs和L1N/L2-LTK63嵌合病毒样颗粒(cVLPs)。源自HPV16L1N基因的病毒样颗粒产量高;本发明还涉及所述病毒样颗粒在制备疫苗中的应用,该疫苗免疫原性好,可预防HPV16感染及相关病变。  
国际公布  
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