方法名称： |
何首乌—蒽醌类成分的测定—HPLC-UV |
应用范围： |
用于何首乌中蒽醌类成分含量的测定 |
方法原理： |
本品用甲醇加热回流，经液相色谱仪分离，在254nm处测定峰面积，以外标法计算含量。 |
仪器设备及实验条件： |
仪器设备 LC-10ATvp 高效液相色谱仪；SPD-10ATvp 紫外-可见检测器， HW-2000色谱工作站。 色谱条件 色谱柱：DiamonsilC18 (250mm ×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15)；流速：1.0 mL/mim，检测波长：254nm；柱温：室温。 |
试样制备： |
对照品溶液制备 精密称取大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含大黄酸1. 600mg、大黄素1.680mg、大黄酚1.720 mg、大黄素甲醚1.600mg的溶液，作为对照品储备液；分别精密量取上述对照品储备液各1 mL，置10mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液Ⅰ；再分别精密量取上述对照品储备液各1mL，置20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液Ⅱ(每1mL中含大黄酸0.0800mg、大黄素0.0840mg、大黄酚0.0860mg、大黄素甲醚0.0800mg) 。 供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL，称定重量，水浴回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为测定游离蒽醌的供试品溶液； 再精密量取续滤液10mL，置锥形瓶中，水浴挥干，加2.5mol/L 硫酸20mL，超声处理5min，加三氯甲烷20 mL，水浴回流1h，放冷，移至分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸水液用三氯甲烷提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷液，水浴挥干，残渣用适量甲醇溶解，移置10 mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为测定总蒽醌的供试品溶液。 |
操作步骤： |
精密吸取对照品溶液Ⅱ以及供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按上述色条件测定峰面积，计算含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
严寒，静傅军，梁从庆等不同采集地何首乌中蒽醌类成分的含量测定.中成药.2007， 29（7)：1023～1026 |
