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人源甲硫氨酰氨肽酶1的表达方法及它在寻找抗肿瘤药物中应用

公开(公告)号 CN1609221A  
公开(公告)日 2005.04.27  
申请(专利)号 CN200310108025.5  
申请日期 2003.10.20  
专利名称 人源甲硫酰氨肽酶1的表达方法及它在寻找抗肿瘤药物中应用  
主分类号 C12N15/52  
分类号 C12N15/52;C12N9/48;C12Q1/25  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国科学院上海药物研究所  
发明(设计)人 李佳;南发俊;叶其壮;李静雅;罗群力;陈玲玲;崔永梅  
地址 201203上海市浦东张江高科技园区祖冲之路555号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 上海开祺专利代理有限公司  
代理人 费开逵;季良赳  
国省代码 上海;31  
主权项 一种人源I型甲硫氨酰肽酶(HsMetAP1)及它的缺失突变(HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135)的表达方法,包括如下步骤:(1)设计不同的正、反向引物;(2)以人源膀胱细胞ECV304的总RNA为模板用RT-PCR方法得该细胞的cDNA,利用上述设计的引物和得到的cDNA用PCR方法得到HsMetAP1的编码序列;(3)用内切酶EcoRI和SalI双酶切质粒载体pGEX-KG用T4连接酶连接、纯化得重组质粒pGEX-KG/HsMetAP1;(4)将上述重组质粒转化入大肠杆菌表达,经提取、纯化得活性蛋白HsMetAP1或HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135。  
摘要 本发明公开了一种人源I型甲硫氨酰氨肽酶HsMetAP1在原核生物大肠杆菌的表达系统,并纯化得到活性蛋白并找到了其活性关键结构的要求;本发明公开了建立HsMetAP1的高通量筛选模型,应用该模型筛选得到活性化合物,找到了活性化合物具有抑制肿瘤细胞生长的活性,以及人源I型甲硫氨酰氨肽酶与肿瘤之间的关系。  
国际公布  
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