公开(公告)号 | CN1712070A |
公开(公告)日 | 2005.12.28 |
申请(专利)号 | CN200410023347.4 |
申请日期 | 2004.06.25 |
专利名称 | 一种基因载体的制备方法及应用 |
主分类号 | A61K48/00 |
分类号 | A61K48/00 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中南大学 |
发明(设计)人 | 周科朝;朱晒红;黄苏萍;李志友 |
地址 | 410083湖南省长沙市左家垅 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 中南大学专利中心 |
代理人 | 袁 翔 |
国省代码 | 湖南;43 |
主权项 | 一种基因载体的制备方法,其特征在于:(1)羟基磷灰石纳米颗粒制备:将分析纯Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4分别溶于去离子水中,配成1mol/L的溶液,将Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合,并用NaOH调节溶液的pH值在11~12范围,搅拌10小时后,老化24小时;再将得到的沉淀物放入高压釜中,在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时,再经清洗、过滤、干燥得到羟基磷灰石纳米颗粒;(2)羟基磷灰石纳米颗粒混悬液制备及急性毒性试验:取羟基磷灰石纳米颗粒0.5g,放入离心管,加去离子水20ml,用超声波分散制备羟基磷灰石混悬液,并加入分散剂,使混悬液充分分散和稳定。用浓度梯度分别为4.5mg/ml、5mg/ml、0.5mg/ml的羟基磷灰石纳米颗粒混悬液尾静脉注射小白鼠,连续两周观察动物的死亡及毒性反应;(3)羟基磷灰石纳米颗粒生物相容性实验:将SGC-7901细胞接种于96孔组织培养板;加入不同浓度的纳米颗粒混悬液,继续培养48h后进行MTT测定。比色法确定有活力的细胞数,方差分析方法采用SPSS9.0统计软件进行。(4)羟基磷灰石纳米颗粒与DNA结合实验:取琼脂糖粉制凝胶羟基磷灰石纳米颗粒混悬液稀释加PEGFP-N1混均10min(VORTEX2GENIE,USA),静置30min,离心;以PEGFP-N11μg为对照,取上清液琼脂糖凝胶电泳检测。羟基磷灰石纳米颗粒混悬液并将其调至不同的pH值,将其分别放入eppendorf管与PEGFP-N1混合,混均,室温静置30min,离心;取上清液琼脂糖凝胶电泳检测;(5)纳米颗粒-DNA复合体体外转染细胞实验:将SGC-7901细胞按接种于培养皿加入配有小牛血清的DMEM培养基培养24h后,在培养皿加入纳米颗粒DNA复合体;以单纯PEGFP-N1表达质粒DNA以及与脂质体结合的PEGFP-N1表达质粒DNA作为对照。混合培养分别于24,48,72h后荧光显微镜下观察结果。 |
摘要 | 本发明涉及医学领域用的材料,尤其是一种基因载体材料的制备方法,其特征在于:将Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合,再将得到的沉淀物放入高压釜中,在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时,得到羟基磷灰石纳米颗粒;它的结构与骨和牙齿相似,是具有良好生物相容性的生物陶瓷材料,可根据应用的要求制备成所需要的几何形态,具有大的表面能,增强其携带DNA的能力,解决了基因载体转导率低、药物易从脂质体中渗漏和难制备等问题,保证了在使用过程中的分散稳定性,满足了基因治病的有效性和安全性。 |
国际公布 |