| 公开(公告)号 | CN1243010C |
| 公开(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申请(专利)号 | CN02139817.8 |
| 申请日期 | 2002.12.11 |
| 专利名称 | 采用氨基化二氧化硅纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法 |
| 主分类号 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分类号 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 湖南大学 |
| 发明(设计)人 | 王柯敏;何晓晓;李 杜;谭蔚泓;黄杉生;陈小洪 |
| 地址 | 410082湖南省长沙市河西岳麓山湖南大学化学化工学院 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 湖南兆弘专利事务所 |
| 代理人 | 赵 洪 |
| 国省代码 | 湖南;43 |
| 主权项 | 一种采用氨基化二氧化硅纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法，以带正电荷的氨基化二氧化硅纳米颗粒为载体，直接与组织裂解液或细胞裂解液相互作用，带正电荷的氨基化二氧化硅纳米颗粒与组织裂解液或细胞裂解液中带负电荷的DNA通过静电作用形成纳米颗粒-DNA复合物，通过离心作用实现纳米颗粒-DNA复合物与组织裂解液或细胞裂解液的分离，再通过解离液将结合在纳米颗粒表面的DNA解离下来，从而实现对DNA的快速纯化；其特征在于：具体工艺步骤为：(1)裂解组织或细胞，取适量组织或细胞，加入适量抽提裂解液于冰上快速磨碎成组织液或细胞液后裂解3-5小时；(2)形成氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA的复合物：利用氨基化二氧化硅纳米颗粒在pH中性的常温介质中，氨基化二氧化硅纳米颗粒表面的氨基质子化可有效地产生净正电，且电动电位高达30mv这一特性，在裂解后的组织或细胞液中加入适量经高温灭菌的氨基化二氧化硅纳米颗粒，振荡混匀，于15-25℃的室温下充分结合5-30分钟，形成氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA的复合物；(3)分离收集氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物：利用氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物和裂解组织液之间的密度差异，对氨基化二氧化硅纳米颗粒进行离心处理，使氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物充分沉淀，收集氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物；(4)解离氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物上的DNA.：在氨基化二氧化硅纳米颗粒-DNA复合物中加入解离液，所述解离液为2-3mol/L的氯化钠溶液或pH10-12的缓冲溶液，室温下放置5-30分钟，让DNA充分洗脱下来；然后对氨基化二氧化硅纳米颗粒于4℃离心10-15分钟，使氨基化二氧化硅纳米颗粒充分沉淀，DNA分布在上层澄清溶液中，收集上层澄清溶液于另一离心管中，重复此步骤2-3次，确保氨基化二氧化硅纳米颗粒表面的DNA全部解离下来；(5)浓缩DNA产物：利用DNA在异丙醇中能够沉降析出的特性，往收集到的内含DNA的上层澄清溶液中加入适量的异丙醇，让其充分混合，于0℃到-20℃下放置10-15分钟，然后于4℃下12000-15000g离心15-30分钟，使DNA从溶液中沉淀出来；(6)收集DNA：倒掉上层澄清溶液，用乙醇洗涤DNA沉淀，再次离心，倒掉上层乙醇溶液，让残留的乙醇自然挥发干净，加入50微升pH为8.0的TE缓冲液溶解DNA沉淀，得到适合浓度的DNA溶液，于4℃下保存。 |
| 摘要 | 采用氨基化二氧化硅纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法，以带正电荷的氨基化二氧化硅纳米颗粒为载体，直接与组织裂解液或细胞裂解液相互作用，带正电荷的氨基化二氧化硅纳米颗粒与组织裂解液或细胞裂解液中带负电荷的DNA通过静电作用形成纳米颗粒-DNA复合物，通过离心作用实现纳米颗粒-DNA复合物与组织裂解液或细胞裂解液的分离，再通过解离液将结合在纳米颗粒表面的DNA解离下来，从而实现对DNA的快速纯化。该方法不需采用酚/氯仿抽提法除去核酸溶液中的蛋白质，缩短了时间、提高了效率，同时免去了酚/氯仿对环境的污染和对人体的毒害作用；该方法为基因转导、突变检测、基因诊断和治疗等研究和应用中DNA的抽提纯化提供了一种新手段。 |
| 国际公布 |
