| 公开(公告)号 | CN1712544A |
| 公开(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申请(专利)号 | CN200410047959.7 |
| 申请日期 | 2004.06.14 |
| 专利名称 | SARS冠状病毒RNA磁性捕获方法及应用该方法的PCR检测 |
| 主分类号 | C12Q1/68 |
| 分类号 | C12Q1/68 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 蔡剑平 |
| 发明(设计)人 | 蔡剑平;黑爱莲 |
| 地址 | 100054北京市丰台区草桥东路16-4022 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京德琦知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 王 琦;宋志强 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种SARS冠状病毒RNA的捕获方法，该方法包括如下的步骤：1)清洗表面包被有亲和素的磁珠，以清除RNA酶，防止RNA的降解；2)将捕获探针P1在5’端用生物素进行标记；3)将清洗过的磁珠与适量经标记的捕获探针P1混合，通过生物素和亲和素的特异结合，使捕获探针P1包被在磁珠表面，4℃保存；4)将标本用TRIzolLS裂解；5)向步骤4)所得溶液中加入包被有捕获探针P1的磁珠，使捕获探针P1捕获SARS冠状病毒RNA；和6)用磁力架收集经步骤5)的溶液中的磁珠，洗涤后，将其溶于适量的DEPC水中，-80℃保存；其中捕获探针P1的序列为：5′-GTAGCCTGGTTAATGTGC-3’；所述标本选自患者的血清、血浆、唾液、尿液、脑脊液或呼吸道分泌物中的一种。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种SARS冠状病毒RNA的捕获方法。具体的是使用生物素标记的捕获探针与包被了亲和素的磁珠结合，通过捕获探针捕获标本中的靶RNA，再用磁力架收集，并洗涤。该捕获方法可去除标本中的蛋白质、非靶RNA和抑制PCR的物质，使靶RNA得到纯化；该方法可同时对靶RNA进行浓缩富集，起到提高靶RNA浓度的目的。此外，本发明还提供了一种双探针捕获方法。在用捕获探针捕获靶RNA前，用预杂交探针与样本中的靶RNA进行预杂交，打开靶RNA的二级结构，进一步提高捕获效率。本发明还提供了一种SARS冠状病毒RNA的RT-PCR检测方法，该方法采用上述捕获方法捕获靶RNA，可大大提高检测的敏感度，有利于对患者进行早期诊断。 |
| 国际公布 |
