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公开(公告)号
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CN1793373A
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公开(公告)日
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2006.06.28
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申请(专利)号
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CN200510057367.8
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申请日期
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2005.11.04
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专利名称
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基因工程制备人白细胞介素24的方法及其表达载体和工程菌
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主分类号
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C12N15/63(2006.01)I
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分类号
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C12N15/63(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国人民解放军第三军医大学
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发明(设计)人
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邹全明;杨 珺;张卫军
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地址
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400038重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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重庆华科专利事务所
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代理人
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康海燕
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国省代码
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重庆;85
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主权项
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一种基因工程人白细胞介素24的表达载体，其特征在于，该载体为含有人白细胞介素24基因序列hIL-24或人白细胞介素24基因突变序列hsIL-24的质粒载体pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24编码序列位于pET32a(+)载体上Kpn1和BamH1酶切位点之间，该载体为pET32a(+)-hIL-24或pET32a(+)-hsIL-24；克隆hIL-24或hsIL-24基因的引物为： P15’-GGTACCGACGACGACGACAAGGCCCAGGGCCAAGAATT(Kpn1) P25’-GGATCCTTACAGAGCTTGTAGAATTTCTG(BamHI) 为避免在N端引入Ala和Met两个多余的氨基酸，在设计引物时将肠激酶识别位点的编码碱基，即加黑斜体部分，加入到上游引物中。
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摘要
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本发明提供一种高效地制备具有一定生物活性的基因工程人白介素24的方法，及其表达载体和工程菌。本发明选用融合表达载体来表达hIL-24或hsIL-24蛋白，所述的表达载体为含有人白细胞介素24基因序列(IL-24)或人白细胞介素24基因突变序列(sIL-24)的质粒载体pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24编码序列位于pET32a(+)载体上Kpn1和BamH1酶切位点之间。所述的基因工程菌是大肠杆菌，并被本发明所述的表达载体所转化，是pET32a(+)-hIL-24/BL21或pET32a(+)-hsIL-24/BL21。本发明的制备工艺中提供了全套的溶解、复性、消化以及纯化的工艺，使目的蛋白的表达量能够达到30％，复性得率大于50％，IL-24的纯度大于95％，且完全适用于工业大规模生产。
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国际公布
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