公开(公告)号 | CN1935995A |
公开(公告)日 | 2007.03.28 |
申请(专利)号 | CN200510017150.4 |
申请日期 | 2005.09.21 |
专利名称 | H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白 |
主分类号 | C12N15/09(2006.01)I |
分类号 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/13(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 金宁一 |
发明(设计)人 | 金宁一;徐一鸣;鲁会军;李 昌;韩 松;金扩世 |
地址 | 130062吉林省长春市青龙路1068号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 |
代理人 | 白冬冬 |
国省代码 | 吉林;22 |
主权项 | 一种H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法,其特征在于: 首先重组质粒pPIC9K-H7HA:将pMD18-TH7HA质粒由Sal I酶切,补平后再经EcoR I酶切,回收得到目的片段;pPIC9K质粒由SnaB I、EcoR I双酶切,去磷后回收;将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-H7HA; 然后进行H7HA蛋白真核表达及制备:用BglII线性化pPIC9K-H7HA重组质粒;线性化后将其电转化至GS115感受态中,在MD平板中培养并经MM板筛选,而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏,提重组体基因组进行PCR鉴定,筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌,离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导,产物离心后取上清,加入饱和硫酸铵沉淀蛋白,收集蛋白进行进一步纯化即得到H7HA抗原蛋白。 |
摘要 | 一种H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法,属于生物技术领域,特别是涉及一种AIV亚型抗原蛋白——H7HA蛋白。本发明提供一种AIV关键的抗原蛋白H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先重组质粒pPIC9K-H7HA,然后进行H7HA蛋白真核表达及制备,即得到H7HA抗原蛋白。本发明以H7HA为研究对象,成功获得了针对H7HA抗体的抗原蛋白,经SDS-PAGE、间接ELISA检测,具良好生物活性。其表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。 |
国际公布 |