公开(公告)号 | CN1322135C |
公开(公告)日 | 2007.06.20 |
申请(专利)号 | CN200410060813.6 |
申请日期 | 2004.09.09 |
专利名称 | 细胞因子IL-24真核表达载体的构建及应用 |
主分类号 | C12N15/79(2006.01)I |
分类号 | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 武汉大学 |
发明(设计)人 | 章晓联;瞿少刚;周 翔;吴建国;陈 明;李平飞 |
地址 | 430072湖北省武汉市武昌珞珈山 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 武汉宇晨专利事务所 |
代理人 | 王敏锋 |
国省代码 | 湖北;42 |
主权项 | 一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建方法,它包括下列步骤: A、目的基因的扩增与纯化,根据人IL-24 GeneBank序列设计引物,上游引物:5’GCAGATCTAATTTTCAACAGAGGCTG-3’,含有BglII酶切位点;下游引物:5’CGGTCGACTCAGAGCTTGTAGAATTTCTG-3’,含有Sal I酶切位点,以插入人IL-24完整编码区基因的质粒TRAPIL-24为模板,采用上述引物从人IL-24 N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增,扩增的反应条件为:95℃预变性2分钟,以95℃变性36秒,56℃退火36秒,72℃延伸1分钟24秒,扩增25个循环,再以72℃延伸5分钟,PCR扩增产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳,将目的条带切下后,用试剂盒回收纯化; B、重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定,将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用BglII和SalI双酶切后,分别用试剂盒回收纯化酶切产物,在T4DNA连接酶作用下定向连接IL-24片段至pEGFP-C1,将连接产物转化入DH5a感受态细菌中,在LB培养基中筛选培养,挑取阳性克隆,培养后提取质粒,采用BglII和SalI双位点单、双酶切鉴定,测序。 |
摘要 | 本发明公开了一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建及应用,其步骤是:首先是目的基因的扩增与纯化,设计上引物和下引物,以质粒TRAPIL-24为模板,采用人IL-24N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增,将目的条带切下后,用试剂盒回收纯化;其次是重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定,将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用Bgl II和Sal I双酶切后,分别用试剂盒回收纯化酶切产物,连接片段,筛选培养,克隆,鉴定,测序。本发明包括证实重组细胞因子IL-24在治疗肝癌、小肠癌、黑色素瘤中的应用。本发明方法简便,操作方便,能抑制、预防和治疗肿瘤的生长。 |
国际公布 |