方法名称： |
苦丁茶—芦丁的含量测定—RP—HPLC |
应用范围： |
本方法适用于苦丁茶中黄酮类化合物（芦丁)含量的测定 |
方法原理： |
本品细粉加甲醇超声提取，经液相色谱分离，在390 nm处测定峰面积，外标法计算含量 |
仪器设备及实验条件： |
仪器 WATERS 600E 高效液相色谱仪，WATERS 2487 UV 检测器，HS色谱数据工作站 色谱条件 色谱柱：Symmetry C18 （5μm，250 mm×4. 6 mm) ；流动相：甲醇—水—磷酸（55∶44. 5∶0. 5)；流速：1. 0 mL/ min；检测波长：390 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL |
试样制备： |
对照品溶液制备 准确称取干燥至恒重的芦丁标准品25. 00 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得浓度为2. 500 mg/mL标准贮备液，装入棕色瓶中保存备用，吸取5 mL标准贮备液，用甲醇稀释定容至50 mL，得浓度为0. 250 mg/ mL的标准溶液备用。 供试品溶液制备 将苦丁茶粉碎，用100目筛子过筛，准确称取1. 00 g苦丁茶末，加50 mL甲醇，超声振荡50 min，提取温度为40 ℃，3500 r/ min离心20 min，取上清液。滤渣再加30 mL甲醇，超声振荡40 min，3500 r/min离心20 min，取上清液，合并上清液至100 mL容量瓶，用甲醇定容至100 mL。放冷，取一定量的提取液过0.45 μm 滤膜，即得。 |
操作步骤： |
分别精密吸取芦丁对照液以及苦丁茶供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算芦丁含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
潘慧娟，唐婷. 反相高效液相色谱法测定苦丁茶中黄酮类化合物（芦丁) 的含量. 杭州医学高等专科学校学报. 2003，24（3)：126～128 |
