决明子-大黄素和大黄酚的含量测定方法-HPLC

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方法名称：	决明子-大黄素和大黄酚的含量测定-HPLC
应用范围：	用于决明子中大黄素和大黄酚的含量测定
方法原理：	本品粉末分别加甲醇超声提取和氯仿回流提取，经液相色谱分离，在254 nm处测定峰面积，外标法计算含量
仪器设备及实验条件：	仪器岛津高效液相色谱系统：ODS—C₁₈色谱柱，LC-6AD泵，SPD—M10AVP紫外检测器，Shidamzu色谱工作站色谱条件色谱柱：ODS—C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm) 流动相：甲醇—0.1 %磷酸溶液（85：15) 流速：1.0 mL/min 检测波长：254 nm 柱温：25 ℃
试样制备：	对照品溶液制备分别精密称取大黄素和大黄酚各2.5 mg，分别置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，配制成浓度均为0.1 mg/mL的大黄素和大黄酚贮备液。分别精密量取大黄素贮备液0.4 mL和大黄酚贮备液0.8 mL，置同一10 mL量瓶中，加甲醇稀释，即得含大黄素40 μg/mL和大黄酚80 μg/mL的对照品溶液。供试品溶液制备 1)超声波提取：取粉碎过4号筛的决明子粉末，精密称定，置100 mL带塞锥形瓶中。加入甲醇（乙醇)25 mL，超声波提取30min，冷却，用甲醇（乙醇)补足减失的重量。高速离心（8000 r/min，15 min)，取5 mL上清，置50 mL圆底烧瓶中，挥去甲醇（乙醇)，加2.5 mol/L硫酸液10 mL，超声处理5 min。再加氯仿10 mL，加热回流60 min，冷却，置分液漏斗分取氯仿层，氯仿液移至100 mL锥形瓶中，置水浴上挥去氯仿。残渣精密加甲醇10 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2)回流提取：取粉碎过4号筛的决明子粉末，精密称定，置50 mL带塞锥形瓶中。加入甲醇（乙醇)25 mL，70 ℃回流30 min，冷却，用甲醇（乙醇)补足减失的重量。后续步骤同超声波提取，即得。
操作步骤：	分别精密吸取大黄素和大黄酚混合对照液以及决明子供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算大黄素和大黄酚含量。
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备注：
参考文献：	廖海，周嘉裕，何成生等. 决明子大黄素和大黄酚的提取与含量测定. 时珍国医国药. 2007，18（6)：1332～1333