连翘提取物－连翘苷的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定连翘提取物中连翘苷的含量。

本方法适用于连翘经加工制成的提取物。

本品加甲醇超声处理，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液蒸干，过柱，洗脱液浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解定容，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长277nm处检测连翘苷的吸收值，计算出其含量。

1. 乙睛

2. 甲醇

3. 50%甲醇

4. 70%乙醇

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙睛 水 ＝25 75

2.2检测波长：277nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

精密称定本品1g，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15mL，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率100W，频率40kHz)25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，蒸至近干，加中性氧化铝1.5g，拌匀，加置中性氧化铝柱（100~200目，3g，内径1~1.5cm)上，用70%乙醇240 mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长277nm处测定连翘苷（C₂₉H₃₆O₁₅)的峰面积，计算出其含量。