全天麻胶囊-天麻素测定-高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定全天麻胶囊中天麻素的含量。

本方法适用于中成药全天麻胶囊。

供试品加入甲醇超声提取，残渣甲醇洗涤定容，用高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长270nm处检测天麻素的吸收值，计算其含量。

1.甲醇（优级纯)

2.乙腈（色谱纯)

3.磷酸

4. 天麻素对照品（中国药品生物制品检定所)

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱：十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂（Nona-PaK C₁₈色谱柱，4.0mm×250mm，4μm)，理论板数按天麻素计为1700。

1.3紫外吸收检测器

1.4 数据处理器

1.5超声发生器

2 色谱条件

2.1流动相：乙腈＋水＝4＋96

2.2流速：0.7ml/min

2.3检测波长：270nm

2.4柱温：30℃

1. 对照品溶液的制备

取经80℃干燥恒重的天麻素对照品约12mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，做成贮备液(0.4768mg/mL)。精密吸取贮备液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(0.09536mg/mL)。将天麻素贮备液(0.4768mg/ml)分别稀释为0.2384mg/ml，0.1192mg/0.0596mg/ml，0.0298mg/ml的浓度系列。

2. 供试品溶液的制备

取全天麻胶囊20粒，倒出其内容物天麻粉，精密称定重量，得出平均每粒胶囊所含天麻粉的重量。再将以上天麻粉混匀，精密称定约0.5g，置25mL具塞锥形瓶中，每次加入甲醇10mL，超声提取60分钟，共提取2次，最后一次与天麻粉共浸24小时。残渣用3～5mL甲醇洗涤。合并甲醇提取液，置25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度即得供试液。

1.　标准曲线与线性范围

分别进样10μl，测定峰面积，以天麻素量(μg)为横座标，峰面积为纵座标Y，得回归方程Y=-24101.9 401634X，r=0.9999，结果表明天麻素在0.298-4.768μg间有良好的线性关系。

2. 供试品的含量测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪测定峰面积，以外标一点法计算出其含量。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。