方法名称： |
黄连上清丸—黄芩苷的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中黄芩苷的含量。 本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
将供试品加乙醇超声提取，加乙醇定容，上清液过滤作为供试品液。精密吸取供试品液10µL，注入液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测黄芩苷吸收值，以外标法计算含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2. 磷酸 3. 乙醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Spherrisorb C18 柱 (300 × 4.6mm，5µm) 1.3 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 水 磷酸 = 55 45 0.2 2.2 流速：0.7mL/min 2.3 检测波长：280nm 2.4 柱温：30℃ |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取研细的本品粉末0.5g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷标准品 (60℃减压干燥4h) 12.8mg，置100mL量瓶内，加50％乙醇至刻度，作为对照品储备液。 3. 标准溶液的制备 精密量取对照品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，置于10mL量瓶中，用50％乙醇稀释至刻度，摇匀，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。 4.供试品溶液的制备 将供试品置50mL容量瓶中，加50％乙醇40mL超声提取30min，加50％乙醇至刻度，摇匀，静置，取上清液，经0.45µm微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液10µL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处测定黄芩苷的吸收值，以标准溶液进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取上述供试品液10µL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处测定黄芩苷的吸收值，用外标法计算出其含量。 |
参考文献： |
姚仲青，金芳. HPLC法测定黄连上清丸中黄芩苷的含量. 云南中医中药杂志，1999，19(6)：590. |
