方法名称： |
黄连上清丸—盐酸小檗碱的测定—分光光度法 |
应用范围： |
本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
供试品加酸性甲醇加热回流提取，提取液经中性氧化铝柱净化后，挥干并加硫酸溶解，加氯仿洗去杂质，分液，硫酸层制成供试液，置紫外可见分光光度计，于波长345nm处测定吸收度，按盐酸小檗碱的吸收系数计算总生物碱含量。 |
试剂： |
1. 盐酸 2.甲醇 3 .0.05mol/L硫酸 4 .中性氧化铝 5 .氯仿 6 .乙醇 |
仪器设备： |
1.紫外可见分光光度计 2 .小玻璃柱 3.索氏提取器 |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品粉末(过三号筛-50目)试样3g。 2. 供试品溶液的制备 将供试品(同时另取本品粉末进行水分测定)置索式提取器中，用适量盐酸-甲醇(1:00)加热回流提取，至提取液无色为止。将提取液转移至100mL量瓶中，用少量盐酸-甲醇(1:100)洗涤容器，洗液并入提取液中，并加至刻度。精密量取10mL，加入氧化铝柱(内径约9mm，中性氧化铝15g，湿法装柱，用乙醇30mL预洗)上，用乙醇70mL分次洗脱，收集洗脱液至100mL量瓶中，加乙醇至刻度，精密量取50mL，置坩埚内，水浴挥干乙醇，用硫酸液(0.05mol/L)20mL分次溶解，转至分液漏斗中，用氯仿萃取，每次加氯仿10mL，至氯仿层无色，分取硫酸层置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 注2：“水分测定“用烘干法。取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100-105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止根据减失的重量，计算供试品中含有水分的百分数。 注3：吸附柱色谱：色谱柱为内径均匀，下端缩口的硬质玻璃管，下端用棉花或玻璃纤维塞住，管内装吸附剂。 注4：湿法装柱：将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。俟填装吸附剂所用的洗脱剂从色谱柱自然流下，液面与柱面相平时，即加供试品溶液。 |
操作步骤： |
1.供试品的测定 供试品测定液照分光光度法，于波长345nm处测定吸收度。 注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在０.３－０.７之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。 |
参考文献： |
谢秀琼，郭力，王富. 黄连上清丸中小檗碱的含量测定. 中国药房，1996，7(3)：109-110. |
