葛根芩连微丸—葛根素的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定葛根芩连微丸中葛根素的含量。

本方法适用于中成药葛根芩连微丸。

供试品加甲醇进行热回流，放冷，滤过，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长250nm处检测葛根素（C₂₁H₂₀O₉)的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇（色谱纯)

2. 乙腈

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

ODS柱（250 × 4mm， 5μm)

1.3 紫外－可见二极管阵列检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 乙腈 水 ＝12 8 80

2.2 检测波长：250nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

精密称取本品粉末（过五号筛-80目)约0.3g。

2. 对照品溶液的制备

精密称取葛根素对照品，加乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

3. 标准溶液的制备

分别精密量取对照品溶液0.20、0.40、0.60、0.80，1.00mL，置于5mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。

4. 供试品溶液的制备

将供试品置于三角烧瓶中，精密加入甲醇50mL，称定，水浴加热回流提取1 h，放冷至室温，精密称量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤。取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1.标准曲线绘制

分别精密吸取上述标准溶液5µL，进入高效液相色谱仪，用紫外检测器测定葛根素的吸收值，以峰面积积分值对标准溶液浓度绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2.供试品的测定

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长250nm处测定葛根素（C₂₁H₂₀O₉)的吸收值，计算出其含量。

吴绍辉、谭晓梅、罗佳波等. 高效液相色谱法测定葛根芩连微丸中葛根素的含量. 中国实验方剂学杂志，1999，5（6)：9-11.