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内科学论文:莱菔硫烷对TNF—α诱导bEnd.3鼠脑血管内皮细胞产生IL—1β的影响

来源:本站原创 更新:2013-10-24 论文投稿平台

1.3 细胞毒性实验

取对数生长期细胞,按8×104/孔接种于96孔板中(200 μL/孔),每组设6个重复孔。SFN孵育结束前4 h各孔加入MTT溶液20 μL(5 mg/mL),随后弃上清,并加入200 μL DMSO,充分混匀,用酶标仪测定各孔的吸光度值(OD570),计算细胞的相对活性,计算公式为:处理组OD值/对照组OD值×100%。

1.4 ELISA

采用双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清中的IL-1β和HO-1,按照深圳欣博盛生物技术有限公司提供的试剂盒操作进行。其检测下限分别为10 pg/mL和5 pg/mL。

1.5 统计学分析

采用SPSS 15.0 统计学软件处理数据,结果采用均数±标准差(x±s)表示,多组比较采用One-way方差分析并行Student’s t检验,P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度SFN对bEnd.3细胞生长抑制率的影响

为了探索SFN唑最佳的作用浓度,本研究采用(0~30) μg/mL对bEnd.3细胞的活性进行了观察,结果显示,(0~30) μg/mL SFN唑对bEnd.3细胞增殖活性无明显影响(图1),因此随后的实验将用浓度高达30 μg/mL的SFN进行。

2.2 SFN对TNF-α诱导bEnd.3细胞产生IL-1β的影响

TNF-α刺激前,bEnd.3细胞无IL-1β产生。5 ng/mL TNF-α处理后,IL-1β含量明显升高。而10~30 μg/mL SFN能明显降低TNF-α诱导的IL-1β产生,见图2。

2.3 SFN对HO-1表达的影响

ELISA结果显示,bEnd.3细胞未刺激条件下HO-1表达水平较低。TNF-α处理后HO-1表达有所增加;而SFN处理后,与TNF-α相比HO-1表达进一步增高(图3)。

2.4 HO-1抑制剂与激动剂对TNF-α诱导bEnd.3细胞产生IL-1β的影响

HO-1抑制剂ZnPP预处理后,能减弱SFN对IL-1β的抑制作用。而HO-1激动剂CoPP则能进一步协同SFN降低TNF-α诱导的IL-1β产生(图4)医.学全.在.线网站www.med126.com


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