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内科学论文:莱菔硫烷对TNF—α诱导bEnd.3鼠脑血管内皮细胞产生IL—1β的影响
[摘要] 目的 研究莱菔硫烷（sulforaphane，SFN)对TNF-α诱导bEnd.3鼠脑血管内皮细胞IL-1β的影响。 方法 体外培养脑血管内皮细胞系bEnd.3，TNF-α刺激前先用30 μg/mL SFN处理2 h，MTT法检测细胞的活性，ELISA检测IL-1β和血红素氧合酶（heme oxygenase，HO-1)的产生。 结果 （0～30) μg/mL SFN对bEnd.3细胞无明显毒性作用。TNF-α能显著诱导bEnd.3细胞产生IL-1β，并能表达一定量的HO-1。经SFN处理后，HO-1表达量增高，且IL-1β产生明显降低。此外，HO-1激动剂CoPP处理能协同SFN降低TNF-α诱导的IL-1β产生，HO-1抑制剂ZnPP能减弱SFN对IL-1β的抑制作用。 结论 SFN通过上调HO-1的产生从而抑制TNF-α诱导bEnd.3细胞分泌IL-1β。
[关键词] 莱菔硫烷；脑血管内皮细胞；血红素氧合酶-1；IL-1β
[中图分类号] R741 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013)10-0001-02
脑血管内皮细胞是血脑屏障重要组成部分，各种因素如缺氧等导致其功能异常后直接引起脑血管通透性增高和血管源性脑水肿，并最终导致脑神经细胞损伤[1]。脑损伤程度及预后不仅取决于脑缺血缺氧的范围和程度，而且与缺血-再灌注损伤的发生密切相关。其中氧自由基连锁反应是神经元受损的核心病理环节[2，3]。生理条件下，机体内自由基的生成和清除之间保持动态平衡，但在某些病理生理条件下，自由基产生过多或清除不足时就会造成组织损伤。脑组织由于富含脂质，本身抗氧化作用比较弱，对缺氧的耐受性低，因此最容易受到自由基的攻击。氧自由基一方面直接使脂质、蛋白质过氧化，使细胞发生不可逆改变；另一方面通过刺激细胞因子、黏附分子以及各种炎性相关介质的表达，介导炎症反应从而加重脑组织损伤，最终导致神经元缺血坏死[4，3]。本研究旨在观察莱菔硫烷对TNF-α诱导血管内皮细胞产生IL-1β的影响，并探讨其可能的作用机制。
1 材料与方法
1.1 主要材料与试剂
鼠永生化脑血管内皮细胞系bEnd.3购自ATCC。培养基DMEM、胎牛血清购自Invitrogen；SFN（分子量177. 3，纯度98.3%)购自美国Alexis公司；钴原卟啉 Ⅸ（CoPP)，锌原卟啉 Ⅸ（ZnPP)为Sigma-Aldrich产品，HO-1和IL-1β ELISA试剂盒购自欣博盛生物科技有限公司医.学全.在.线网站www.med126.com。
1.2 细胞培养与处理
bEnd.3细胞用含20%胎牛血清的DMEM培养基于37℃、5%CO2条件下培养。实验分为正常对照组、TNF-α模型组和SFN干预组。其中对照组仅加入0.1%DMSO，模型组细胞加入5 ng/mL TNF-α；SFN不同浓度干预组在模型组基础上分别加入5 μg/mL、10 μg/mL、30 μg/mL SFN，于24 h后收集细胞。
