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2.3 肾小球GBM的超微结构观察
透射电镜下可见，正常大鼠GBM结构良好，足突排列整齐清晰，内皮孔清晰可见。3周时可见GBM上足突增宽、部分或弥漫性融合甚至消失，足细胞有肿胀、细胞数明显减少，表示造模成功。干预结束与B组比较，各治疗组上述病变不同程度得到改善，足突结构清晰、足突数目增多，其中C、E组改善明显(图1)。
2.4 肾小球GBM上AS的检测结果
PEI示踪的AS在透射电镜下呈颗粒状，沿着GBM和足突的形态分布。空白组大鼠GBM上PEI染色颗粒致密、大小规则，呈点线样分布;颗粒分布以单层和双层排列为多见，仅在少数GBM节段上可见3层排列，颗粒主要分布在外疏松层，内疏松层可见少数PEI颗粒，但着色浅，排列和大小不规则。模型组大鼠GBM上PEI染色颗粒数量明显减少，间距显著增大并伴有颗粒丢失，部分GBM显示不清晰，足突溶解融合。干预结束后，各组大鼠GBM上PEI染色颗粒均有所上调，其中C、E组上调明显，排列较规则;D组大鼠PEI着色较深，F组颗粒数量与B组无明显差异(图2)。对药物干预后所有PEI染色的电镜标本AS进行定量(个/1000nm GBM)分析，结果显示，干预结束后与B组比较，C、D、E组大鼠GBM上PEI染色颗粒计数明显增多(P<0.01)，F组颗粒数量则无明显差异(表5)。表5 各组大鼠实验7周时的AS计数(略)与A组比较，#P<0.01;与B组比较，^^P<0.01。
3 讨 论
肾小球滤过屏障由血管内皮细胞、GBM及足细胞间的裂隙膜组成。GBM为一满布负电荷的筛网，能限制大分子蛋白质及带负电荷的物质通过，其重要的结构功能蛋白——硫酸肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan, HSPG)带负电荷而发挥其分子屏障和电荷屏障的功能。电荷屏障由肾小球的多阴离子及GBM上的AS两部分组成。多阴离子主要是位于肾小球上皮细胞及内皮细胞表面的涎糖蛋白,带阴电荷成分主要是涎酸;GBM上的AS则由内、外疏松层的HSPG组成。研究显示，GBM上AS减少主要与HSPG的核心蛋白Perlecan和其HS侧链减少以及Agrin蛋白的减少有关[2]。用PEI染色和阳离子胶体金技术对AN模型的研究发现，肾小球固定阴电荷明显减少，可能与NO的调节有关[3]。在Heymann肾炎大鼠模型中，用PEI染色也发现AS位点明显减少，与白蛋白的丢失明显相关[4]。因此，研究GBM上AS的变化对于肾小球电荷屏障的结构和功能有着重要的意义。
PEI是强阳离子大分子聚合物，其染色途径多样，能保持肾小球超微结构稳定，可与带负电荷基团在原位结合,且不仅能结合GBM上的AS，也可结合系膜区、小管基底膜和间质中的AS[5]。其与重金属络合成密度较高的细颗粒, 在透射电镜下可测定其大小、间距和分布，已广泛用于电荷屏障的研究。用PEI示踪发现STZ诱导糖尿病大鼠GBM明显增厚，但GBM上AS显著减少,胰岛素治疗或噻唑烷二酮干预可以阻止AS减少，即可有效修复GBM电荷屏障，降低尿白蛋白排泄率[6-7]。肾脏缺血再灌注后造成的肾脏损伤亦可通过此法观察到GBM上AS显著减少[8]。恰当的中西医结合防治能有效地修复AN大鼠GBM电荷屏障[9-10]。医.学全.在.线网站www.med126.com
中药制剂在防治肾病蛋白尿方面有一定的优势。本研究结果显示，祛风组、激素组在修复GBM上AS方面疗效显著，而激素加祛风组、苯那普利组则疗效稍差，提示祛风通络方能够有效防治蛋白尿，改善AN大鼠的相关生化指标和GBM上AS的表达和分布异常，从而有效修复AN大鼠GBM电荷屏障。其机理可能为：该方良好的免疫调节作用抑制了AN大鼠的GBM及足细胞损伤;改善GBM相关蛋白HSPG和其HS侧链的表达，从根本上修复GBM电荷屏障;其抗炎抗凝作用亦可改善AN大鼠的炎性介导损伤及GBM的血供。祛风通络方(乌梢蛇、海风藤、防风、黄芪、桑寄生、生地)是在长期临床应用的基础上加减而成。作者认为肾病病因病机之一是风邪伏于空虚之肾络，久而肾络瘀滞不通，发为肾病，此即“风伏肾络”病机。治疗以祛肾络之风邪为主，兼补肾络之虚损和通肾络之瘀滞，创立祛风通络方剂。方中乌梢蛇祛风通络为君药;海风藤、防风祛风胜湿通络为臣药;佐以黄芪益气祛风通络，桑寄生滋肾祛风湿;使以生地养阴生津，既防诸药之燥，又引诸药入肾经。全方体现祛风通络、益气补肾之功。药理研究认为，乌梢蛇具有抗炎作用;海风藤具有抗炎及免疫抑制及抗内毒素作用;而黄芪具有改善全身血流动力学，调节机体免疫机能等作用。该方所体现的免疫调节、抗凝、溶栓及抗增生作用亦符合肾病病理机制。前期研究也显示，本方对大鼠肾小球系膜细胞的增殖及其TGF-β1和IL-6的mRNA表达有明显的抑制作用，对增殖性肾炎有着良好的应用前景[11]。临床应用本方，没有皮质激素的副作用，适合长期使用。
