新清宁片—大黄素的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定新清宁片中大黄素的含量。

本方法适用于由熟大黄等几味中药制成的新清宁片。

供试品粉末置磨口锥形瓶中，精密加入无水乙醇，塞紧，称定重量，置水浴上加热回流1h，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1)溶液，置水浴中加热水解1h，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm)过滤，精密吸取续滤液10μL，注入高效液相色谱仪，用紫外检测器检测大黄素的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇（色谱纯)

2. 无水乙醇、醋酸乙酯（分析纯)

3. 大黄素（购自中国药品生物制品检定所)

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Nucleosil ODS C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm)。

1.3 紫外检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 水=85 15（含0.1%的磷酸)

2.2 柱温：室温

2.3 检测波长：254 nm

2.4 流速：1.0mL/min

1. 称取供试品

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细（过65目筛)，精密称取药粉0.5g。

2. 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品适量，用无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解制成浓度为0.05mg/ml，作为对照品溶液。

3. 供试品溶液的制备

供试品粉末置磨口锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml，塞紧，称定重量，置水浴上加热回流1h，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1)溶液15ml，置水浴中加热水解1h，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm)过滤，取续滤液作为供试品溶液。

1.标准曲线的绘制

分别精密吸取上述对照液2 、4 、6 、8、10μl进样，用紫外检测器测定大黄素的吸收度值，以标准溶液浓度对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

精密吸取上述供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外检测器测定大黄素的吸收度值，计算出其含量。

苗明三，李振国 主编. 现代实用中药质量控制技术. 北京：人民卫生出版社，2000，83-84.