乙型肝炎病毒(hepatitis B virus ,HBV) 感染后血清标志物的模式表现呈多样化。本科血清免疫室2004 年共检测到42例少见模式,占阳性总例数的0.6 %(42/6744) ,其中HBsAg(-)、抗-HBs(-)、HBeAg (+)、抗-HBe (-) 、抗-HBc (+) 者33例, HBsAg(十)、抗-HBs (-)、HBeAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc (+) 者9例。更换不同厂家试剂检测得到相同结果。HBV DNA 采用PCR检测42例均呈阳性。现分别对上述两种少见模式的HBsAg (-)(P/N 0.1～2.0) 和抗-HBe(+) (抑制率0.6～0.8)作进一步检测分析。
资料与执业医师网方法
1.材料:42例样本采自本院门诊及住院患者,男30例,女12例,年龄16～65岁。经复检证实后,取血清置加盖试管内-20℃保存备检。
2. 试剂:乙型肝炎“两对半”检测用上海科华公司试剂,复检用深圳月亮湾试剂,美国产MR500 酶标仪。HBV DNA2PCR 检测用杭州高乐公司试剂,美国产DE9600基因扩增仪。
结 果
1. 33 例HBsAg(-) 样本用生理盐水按1∶8、16、⋯⋯128等比稀释,分别检测各管HBsAg ,其中阳性11例(各稀释度最大P/N 3.7～23.6);其余22例阴性者用酸解离HBsAg免疫复合物法处理, 检测得到HBsAg阳性19例( P/N 2.6～25.8), 22例中3 例HBsAg 阴性者因样本已用尽, 无法进一步检测。
2. 9 例抗-HBe (+)的样本改用二步法检测:孔底加50μl样本及中和HBeAg液50μl混匀,置37℃水浴30 min。洗板3次,扣干。再加辣根过氧化物酶( horseradish peroxidase,HRP)-抗-HBe 50μl ,37℃水浴30 min ,洗板扣干。接下来按说明书操作。结果抗-HBe 9 例全部阴性。
讨 论
1. HBV 感染后,血清中HBeAg 在HBsAg之后出现。偶尔出现HBsAg(-)、HBeAg (+) 情况,首先考虑有少数病例会出现窗口期,其血液中同时存在HBsAg 和抗-HBs ,若浓度正好合适全部形成免疫复合物,导致游离的HBsAg 消失或浓度降低, HBsAg和抗-HBs 都不能被检出。其次, 部分病例HBsAg浓度过高发生大剂量前带现象,致使检测呈假阴性,适当稀释样本即可避免。再者,由于HBV基因组具有高度变异性,S区基因突变可致HBsAg氨基酸序列改变而无法检出。X区突变则抑制X蛋白的转录活性及激活HBV增强子的作用,使病毒蛋白表达减少,造成血清中各指标滴度下降,甚至不能检出。
2. 目前市售ELISA 试剂多为一步法,其弊端多见报道。抗-HBe检测时,若血清中含有浓度较高的HBeAg ,相当于加入了过量的中和抗原,同步加入定量的HRP-抗-HBe ,会形成大量游离的HBeAg-HRP2抗-HBe, 而与固相化的抗-HBe-HBeAg结合,形成抗-HBe-HBeAg-HRP-抗-HBe的量减少,导致假阳性。改用两步法,在固相化抗-HBe-HBeAg形成后再加入HRP-抗-HBe试剂,无游离的HBeAg-HRP-抗-HBe形成,可避免和减少假阳性的发生。
