利用RNA干扰现象介导功能基因下调的腺相关病毒载体
医药数据库中心 药学论坛 本元正阳基因技术股份有限公司;病毒基因工程国家重点实验室/吴小兵;马鑫;鲁晓春;侯云德
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公开(公告)号
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CN1475573A
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公开(公告)日
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2004.02.18
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申请(专利)号
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CN02125762.0
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申请日期
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2002.08.16
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专利名称
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利用RNA干扰现象介导功能基因下调的腺相关病毒载体
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主分类号
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C12N15/63
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分类号
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C12N15/63;C12N15/52;C12N15/86;C12N7/01
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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本元正阳基因技术股份有限公司;病毒基因工程国家重点实验室
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发明(设计)人
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吴小兵;马鑫;鲁晓春;侯云德
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地址
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100176北京市北京经济技术开发区永昌中路6号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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应用AAV载体质粒pSNAV构建携带有RNAi核苷酸转录单元重组质粒；
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摘要
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本发明涉及用质粒携带RNAi核苷酸片段，将携带RNAi的质粒转染至体外培养的细胞内或动物体内，从而使质粒能在细胞内或动物体内源源不断地复制RNAi核苷酸片段，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。另外，该RNAi核苷酸片段也被包装成为一种携带了RNAi核苷酸片段的重组腺相关病毒载体，通过腺相关病毒载体进行RNAi核苷酸片段的基因转移和复制，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。在本发明中，构建了一个短发夹环表达质粒在BHK-21细胞中抑制荧光素酶的表达。具体方法是从人基因组DNA中设计引物用PCR调出人U6 snRNA启动子，与被9bp序列间隔的21bp荧光素酶靶序列的反向重复，以及AAV载体质粒pSNAV相连接，构建成荧光素酶RNAi表达质粒pSNAV/U6/Luc。与pMAMneoLuc质粒共转染BHK-21细胞，以及单独转染荧光素酶细胞株，分别检测对荧光素酶表达的抑制效果。实验结果显示pSNAV/U6/Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制50％，而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制70％。抑制实验证实体内转录出的短发夹环荧光素酶能够有效抑制其在BHK-21细胞中的表达。
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国际公布
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