公开(公告)号 | CN1603405A |
公开(公告)日 | 2005.04.06 |
申请(专利)号 | CN03134768.1 |
申请日期 | 2003.09.29 |
专利名称 | 高纯度蚓激酶的制备方法及由其制备的药物制剂 |
主分类号 | C12N9/48 |
分类号 | C12N9/48;A61K38/48;A61P7/02 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 北京赛生药业有限公司 |
发明(设计)人 | 马骉;魏化伟;吴丹;宋梦薇;张颖 |
地址 | 100078北京市经济技术开发区兴盛街8号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 |
代理人 | 徐金国;梁挥 |
国省代码 | 北京;11 |
主权项 | 一种高纯度蚓激酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)蚓激酶粗品的提取:取鲜活蚯蚓用水洗净,加入食盐处理;加入pH6.8~8.3的缓冲液,用胶体磨制备匀浆;将匀浆液反复冻融;将匀浆液加热,去除对热不稳定的杂蛋白;将匀浆液离心,取上清液;上清液经超滤浓缩,截留分子量为10000~50000道尔顿的组分,冷冻干燥制得蚓激酶粗品;(2)蚓激酶粗品的纯化:将步骤(1)中获得的蚓激酶粗品溶于缓冲液中,离心,取上清液用离子交换层析柱分离,得到蚓激酶活性组分;(3)蚓激酶活性组分的再纯化:将步骤(2)中的蚓激酶活性组分用亲和层析平衡缓冲液溶解,用单克隆抗体亲合层析柱进行再纯化,用缓冲液平衡至流出液在蛋白检测仪上绘出稳定的基线后,再用含有洗脱剂的亲和层析洗脱液洗脱,收集活性洗脱峰,冷冻干燥得到高纯度的蚓激酶。 |
摘要 | 本发明公开一种高纯度蚓激酶的制备方法及以其为原料药的制剂。本发明通过采用单克隆抗体技术实现蚓激酶活性组分的再纯化,从而得到高纯度蚓激酶,该方法的特点是所获酶的专一性强,活性高,达到每毫克蛋白20万单位以上;经高效液相色谱测试为单一组分;在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现一条带,分子量为32000±2000道尔顿;氨基酸序列分析,N-末端10个氨基酸序列为:Ile-Val-Gly-Gly-Ile-Glu-Ala-Arg-Pro-Tyr,以所述高纯度蚓激酶为原料药可以制成可供口服、肌注、以及静脉注射与静脉输液多种途径给药的制剂,用于血栓性疾病的治疗。 |
国际公布 |