| 公开(公告)号 | CN1259336C |
| 公开(公告)日 | 2006.06.14 |
| 申请(专利)号 | CN200310121343.5 |
| 申请日期 | 2003.12.12 |
| 专利名称 | 一种复合干扰素的纯化方法 |
| 主分类号 | C07K14/555(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/555(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院过程工程研究所 |
| 发明(设计)人 | 刘永东;李京京;王芳薇;苏志国 |
| 地址 | 100080北京市海淀区中关村北二条1号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 王凤华 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种重组复合干扰素的纯化方法，包括如下步骤：1)将经复合干扰素基因人工构建、并由含此DNA序列表达载体的宿主细胞发酵并收集的包涵体变性得到的复合干扰素，边搅拌边加入缓冲液D，所加入的缓冲液D与复合干扰素的体积比为40～100∶1，然后将混合液静置过夜；2)将步骤1)经静置的混合液装入可以透过分子量8000-50000的透析袋中，于缓冲液E中透析12～24小时，进行复合干扰素蛋白质的复性，缓冲液E与混合液的体积比为5～20∶1；3)从步骤2)经透析的混合液中分出上清液，得到复性的复合干扰素溶液；4)用缓冲液F平衡装有强阳离子交换介质的层析柱，介质装填高度为5～25cm，将步骤3)的已复性的复合干扰素溶液调pH至3.5～6.0后上柱，上样量为8-15mg/ml，然后用2倍柱体积的缓冲液F淋洗，再用5～10倍柱体积的含缓冲液G和缓冲液F的混合液进行梯度洗脱，淋洗时的流速为50～200cm/min，收集第二个蛋白洗脱峰时的洗脱液，最后将此洗脱液浓缩，得到纯化的复合干扰素；所述步骤1)的缓冲液D为100mMTris、0.5M精氨酸和0.2mM乙二胺四乙酸二钠，用HCl调pH至8.3；所述步骤2)的缓冲液E为25mMTris-HCl，pH8.3；所述步骤4)的缓冲液F为pH3.5～6.0的5～50mM磷酸氢二钠—磷酸二氢钠，柠檬酸—柠檬酸钠，磷酸氢二钠—柠檬酸，柠檬酸—氢氧化钠—盐酸，乙酸钠—乙酸或磷酸二氢钾—氢氧化钠；所述步骤4)的缓冲液G为1MNaCl溶于所述步骤4)的缓冲液F中；所述步骤4)用于梯度淋洗的混合缓冲液中缓冲液G占混合缓冲液总体积的10～60％。 |
| 摘要 | 本发明提供一种复合干扰素的纯化方法，包括如下步骤：将经常规方法发酵并收集的包涵体变性得到的复合干扰素，边搅拌边加入缓冲液D，然后在可以透过分子量50000以下的透析袋中，于缓冲液E中透析，进行复合干扰素蛋白质的复性；分出上清液，在装有强阳离子交换介质的层析柱上用缓冲液F和缓冲液G梯度洗脱，得到纯化的复合干扰素。本方法不仅能完全去除分子量在3～4万的杂蛋白，而且能将复性中间体与完全复性的蛋白基本分开，从而所得复合干扰素纯度高，产品结构也更均一。 |
| 国际公布 |
