公开(公告)号 | CN1800202A |
公开(公告)日 | 2006.07.12 |
申请(专利)号 | CN200610037909.X |
申请日期 | 2006.01.20 |
专利名称 | 从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法 |
主分类号 | C07K1/14(2006.01)I |
分类号 | C07K1/14(2006.01)I;C07K14/805(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 南京师范大学 |
发明(设计)人 | 金邦荃;汤祥明;刘兴余 |
地址 | 210097江苏省南京市宁海路122号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 南京知识律师事务所 |
代理人 | 卢亚丽 |
国省代码 | 江苏;32 |
主权项 | 一种从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法,包括以下步骤: 1)将新鲜动物心肌剁碎,加入冰冷的肌红蛋白萃取缓冲液,经匀浆、离心、过滤后得粗提液;所说的肌红蛋白萃取缓冲液是10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0; 2)粗提液经70%-100%硫酸铵盐析,得到的沉淀用平衡缓冲液A重悬,再加入过量的K3Fe(CN)6,离心后取上清液对平衡缓冲液A透析,透析膜的截留分子量为14000,得透析液;所说的平衡缓冲液A是10mMTris-HCl,1mMEDTA,10mMNaCl,pH8.5; 3)将透析液上样到DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析柱,用平衡缓冲液A洗脱,收集洗脱峰对应的红褐色洗液; 4)将收集的洗脱液泠冻干燥浓缩后,上样到SephacrylS-200HR凝胶过滤层析柱,用平衡缓冲液B洗脱,收集洗脱峰相对应的红褐色洗脱液,即得到纯化的高铁肌红蛋白;所说的平衡缓冲液B是100mMTris-HCl,100mMNaCl,pH7.5。 |
摘要 | 本发明涉及一种蛋白的提取纯化工艺,具体是从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法。具体的方法是:将新鲜动物心肌经前处理,萃取得到组织蛋白粗提物;粗提物再经硫酸铵盐析后,通过截留分子量为14000的透析处理得透析样品;将透析样品经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,收集红褐色洗脱液;收集的洗脱液再经Sephacryl S-200HR凝胶过滤层析,收集洗脱峰相对应的红褐色洗脱液,即得到纯化的高铁肌红蛋白。本发明方法具有产品纯度高,工艺简单、成本低等优点,既可填补我国该生物试剂制备的空白,又具有较高的经济价值。 |
国际公布 |