| 公开(公告)号 | CN1876812A |
| 公开(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申请(专利)号 | CN200510075065.3 |
| 申请日期 | 2005.06.09 |
| 专利名称 | 应用RNA酶保护法高通量筛选天然存在的正义-反义转录物 |
| 主分类号 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国医学科学院基础医学研究所 |
| 发明(设计)人 | 刘德培;柯细松;宫 环;陆 璐;屈 祎 |
| 地址 | 100005北京市东城区东单三条5号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 本发明涉及一种高通量筛选细胞内真正的正义-反义转录物的新方法，实施步骤为： i. 提取组织总RNA。 ii. 用RNaseI处理总RNA。 iii. 证实残余的RNA是双链RNA(Double-stranded RNA，dsRNA)。 iv. 证实残余的RNA是细胞内源的RNA。 v. 把双链RNA变性为单链RNA。 vi. 把单链RNA逆转录为互补的DNA(Complement DNA，cDNA)。 vii. 在cDNA的3’端加上多聚A。 viii. 合成cDNA的第二条链。 ix. 制备双链DNA(Double-stranded DNA，dsDNA)的一个平端和一个粘端。 x. 把双链DNA克隆入克隆载体。 xi. 把重组载体转化如宿主细胞，构建总RNA中NSATs的cDNA文库。 xii. 对克隆进行序列测定。 xiii. 把克隆序列进行生物信息学分析。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种高通量筛选天然存在的正义-反义转录物(Naturalsense-antisense transcripts，NSATs)的新方法。本发明利用细胞内NSATs是双链RNA分子的特点，以及双链RNA分子能够免受单链RNA特异的RNase I的酶解作用，从而在RNase I酶解反应中保留下来的特性，建立了通过实验的手段来实现高通量筛选细胞内真正的NSATs的方法。利用这一方法，可以通过高通量筛选各种来源和状态的组织或细胞内真正的正义RNA-反义RNA复合物，理论上，通过该方法可以获得细胞内任何一个存在的NSATs。在鉴定RNA作用的靶向基因或筛选潜在的RNA药物时，本发明也有重要的应用价值。 |
| 国际公布 |
