山银花－绿原酸的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定山银花中绿原酸的含量。

本方法适用于忍冬科植物灰毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、红腺忍冬 Lonicera hypoglauca Miq. 或华南忍冬Lonicera confusa DC.的干燥花蕾或带初开的花。

供试品于具塞锥形瓶中，加50%甲醇超声提取，过滤，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长327nm处检测绿原酸的吸收值，计算出其含量。

1. 50%甲醇

2. 0.4%磷酸溶液

3. 乙腈

1 仪器

1.1高效液相色谱仪

1.2色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙腈 0.4%磷酸溶液 ＝12 88

2.2检测波长：327nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

精密称取本品粉末（过四号筛)0.5g，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品适量，置棕色瓶中，加50%甲醇溶液制成每1mL含40mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品粉末（过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长327nm处测定绿原酸（C₁₆H₁₈O₉)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p21。