方法名称： |
芎菊上清丸－盐酸小檗碱的测定－薄层扫描荧光法 |
应用范围： |
本方法适用于中成药芎菊上清丸。 |
方法原理： |
供试品本品加盐酸-甲醇(1∶100)，浸泡过夜，超声，滤过，制成供试液，点样、展开，用薄层扫描仪进行荧光锯齿扫描，激发波长366nm测量盐酸小檗碱吸收度积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 盐酸 2. 甲醇 3. 苯 4. 醋酸乙酯 5. 异丙醇 6. 浓氨溶液 7. 盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 薄层扫描仪 1.2点样器：定量毛细管 1.3展开室 可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。 1.4薄层板：以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板 1.5 超声振荡仪 2 实验条件 2.1 展开剂：苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨溶液(12∶6∶3∶3∶1) 2.2 展开距离：浓氨溶液预平衡后，上行展开8ｃｍ取出，晾干。 2.3 定位：紫外灯下确定斑点位置 2.4 扫描方式：荧光锯齿扫描，激发波长366nm，3号滤光片，狭缝2mm×2mm，灵敏度2，设背景校正。 |
试样制备： |
1. 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加盐酸-甲醇(1∶100)的混合溶液配制成0.06mg/mL的溶液，作为对照品溶液。 2. 供试品溶液的制备 本品6g，研细，过65目筛，取约1g，精密称定，置具塞三角瓶中精密加盐酸-甲醇(1∶100)的混合溶液25mL，称定重量，浸泡过夜，超声处理45min，放冷，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的建立 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂硅胶GF254薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨溶液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂， 浓氨溶液预平衡后，上行展开8cm取出，晾干，紫外灯下确定斑点位置，进行荧光扫描测定，激发波长366nm，测量对照品荧光强度积分值，计算回归方程Y=18611.9X 6274.9，r=0.9995；线性范围为0.06～0.30μg。 2.供试品含量测定 精密吸取供试品溶液1～2μL(供试品点样量在0.06～0.12μg之间)，对照品溶液1μL与2μL，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂硅胶GF254薄层板上，按标准曲线项下方法展开，扫描测定，按外标二点法计算盐酸小檗碱含量。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
参考文献： |
韩桂茹，徐韧柳，赵晓春，芎菊上清丸质量标准研究，解放军药学学报，2002，18(2)：88～90 |
