方法名称： |
黄连上清丸—黄芩苷的测定—高效液相色谱法 2 |
应用范围： |
本方法采用反相高效液相色谱法测定黄连上清丸中黄芩苷的含量。 |
方法原理： |
将供试品用甲醇超声提取，加入甲醇定容，过滤，续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品液10µL，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处检测黄芩苷吸收值，以外标法计算含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2. 醋酸 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Hybersil ODS柱 (200 × 4.6mm，5µm)。 1.3 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 水 醋酸 = 40 60 1 2.2 流速：1.0mL/min 2.3 检测波长：274nm 2.4 柱温：30℃ |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取研细的本品粉末1.5g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷标准品(60℃减压干燥4h)12.5mg，置25mL量瓶中，加50%甲醇适量，振摇，使对照品溶解，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀。超声除去气泡，用50%甲醇至刻度，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.0mL置10mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，用0.45µm微孔滤膜过滤，制成每1mL含黄芩苷0.1µg的溶液，作为对照品溶液。 3. 标准溶液的制备 分别精密量取对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL分别置10mL量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。 4.供试品溶液的制备 将供试品精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用50％甲醇补足减失重量，用0.45µm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液10µL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处测定黄芩苷的吸收值，每个浓度点进样2次测定。以标准溶液进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到标准曲线方程。 2. 供试品的测定 精密吸取对照品溶液及供试品溶液10µL，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处测定黄芩苷的吸收值，用外标法计算出其含量。 |
参考文献： |
姜红，董润芬，崔萍. RPHPLC法测定黄连上清丸中黄芩苷的含量. 天津药学，2002，14(3)：72-73. |
