方法名称： |
香连丸－小檗碱的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定香连丸中小檗碱的含量。 本方法适用于中成药香连丸的测定。 |
方法原理： |
供试品于索氏提取器中经盐酸-甲醇加热回流，过滤，滤液蒸干，并用盐酸-甲醇稀释，制成供试液。点样、展开，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λS=350nm，λR=365nm测量盐酸小檗碱吸收度积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 盐酸 2 .甲醇 3 .苯 4.醋酸乙酯 5.异丙醇 6.氨水 |
仪器设备： |
1仪器 1.1薄层扫描仪 1.2涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.3点样器 一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 1.4展开室 可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。 2材料 2.1玻板 用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。 |
试样制备： |
1.对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，加盐酸-甲醇(1:100)溶解并配成浓度为14.4，28.8，43.2，57.6，72.0，86.4，115.2，161.1μg/mL的标准溶液。 2.供试品溶液的制备 精密称取香连丸适量（相当于黄连0.1g)置100mL量瓶中，加盐酸-甲醇（1：100)95mL，60℃水浴温浸30min，强超声处理1h，室温放置24h，加盐酸-甲醇（1：100)定容于5mL量瓶中，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
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操作步骤： |
1薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2点样 2.1对照品点样 各吸取标准系列浓度的盐酸小檗碱溶液1μL点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 2.2供试品点样 精密吸取69.2μg/mL供试品溶液和161.2μg/mL对照品溶液各1μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨水（46:15:12:5:4滴)为展开剂，上行展开挥干溶剂后测定。 4含量测定 4.1标准曲线绘制 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行荧光扫描测定，激发光波长343nm，测量对照品荧光强度，以盐酸小檗碱点样量(μg)对荧光强度积分值回归，绘制标准曲线。 4.2供试品测定 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行荧光扫描测定，激发光波长343nm，测量供试品荧光强度，计算含量。 |
参考文献： |
张小荣，刑黎明，王兰，等. 荧光薄层法测定香连丸中小檗碱.西北药学杂志，1998,13(6):284 |
