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运行缓冲液的浓度及pH值对ECL光强的影响： 因运行缓冲液的pH值影响分离中的电渗流大小和分析物所带电荷，从而影响其分离效果。实验中考察了20mmol/L pH值5.0～9.5范围内磷酸盐缓冲液对ECL光强的影响，发现当pH值为7.16时发光强度达到最大，而后ECL光强随着pH值的增大而减小。固定运行缓冲溶液pH值到7.16，考察了磷酸盐缓冲液浓度在10～50mmol/L范围内变化时ECL光强的变化，当浓度大于30mmol/L时，ECL光强有所降低，可能是因为离子强度的增加导致焦耳热效应的增加。故在实验中选择pH值为7.16的20mmol/L的运行缓冲液。
进样高压和进样时间对ECL光强的影响： 仪器采用自动电迁移进样，按2.1中公式，对于特定分析物和毛细管，电动进样体积决定于进样时间ti，进样电压Ei和分离电压Es。其毛细管柱效按以下公式评价[1]：N=5.54(tm/W0.5h)2，N表示理论塔板数，tm是迁移时间，W0.5h表示半峰宽。在考察进样时间对ECL光强的影响时发现当其在3～19s变化时，在10s时ECL光强达到最大。因此选择进样时间为10s。当进样高压在3～19kV范围内变化时，随着进样高压的增加，ECL光强增强但是柱效降低。在进样高压达到15kV之后，电泳峰开始变宽，因此选择进样电压为15kV。电化学发光反应是在工作电极表面发生。因此，ECL光强依赖于工作电极表面扩散层分析物的浓度，在高的进样电压下，较多的分析物进入扩散层，产生较强的ECL光强。然而，当进样量过大时，分析物的散布导致峰展宽，柱效降低。综合各因素，将进样时间和进样电压确定为10s，15kV。
2.2 检测条件的优化
2.2.1 检测电位对ECL光强的影响
施加在电极上的电压引发化学发光反应，从而影响其ECL发光强度。因此，检测电位应至少高于发光试剂的氧化电位，以使其生成Ru(bpy)3+3。当检测电位在小于1.10V时，光信号为零。在1.10～1.30V范围内变化时，发光强度随着检测电位的增加而增加，当检测电位为1.22V时，发光强度达到最大，而后随着检测电位的增加而减小，故选择1.22V为检测电位。
2.2.2 检测池中溶液浓度及其pH值对ECL光强的影响
检测池中联吡啶钌及磷酸盐缓冲液的浓度、pH值对发光强度有影响。实验研究了3～50mmol/L联吡啶钌浓度的变化对ECL光强的影响，发现当联吡啶钌的浓度为5mmol/L时可以得到较大的ECL光强，当其浓度大于5mmol/L时基线开始漂移，选取其浓度为5mmol/L。当磷酸盐缓冲液浓度为50mmol/L时有较大的ECL光强，故选择检测池中钌联吡啶的浓度为5mmol/L，磷酸缓冲溶液浓度为50mmol/L。
联吡啶钌在弱碱性溶液中有较强的化学发光强度。当磷酸盐缓冲液的pH值在4.5～9.5范围内变化时，三种药物的ECL光强也随之显著变化，当pH值为8.5时光强达到最高峰，故选择检测池中缓冲液的pH值为8.5。
2.3 方法学考察
2.3.1 方法回收率
按处方比例，取三种主药成分及各种辅料配制成样品后，测定三种组分的回收率。磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸溴苯那敏的平均回收率分别为100.4 %，99.8%，101.9%;相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)分别为2.2%，1.9%，3.1%(n=5)。结果表明，三种组分的回收率均较好，RSD较小，说明该分析方法是准确可靠的。
2.3.2 线性范围
以时间t(s)为横坐标，以ECL光强为纵坐标记录1.2项下混合对照品溶液的电泳图(图2)。根据处方的比例，将三种主药成分配制成一系列不同浓度的混合对照品溶液，依次进行毛细管电泳电化学发光分析，确定方法学考察各参数(表1)。
2.3.3 配制溶液的稳定性实验
在本实验条件下，配制溶液具有较好的稳定性，同一溶液连续3d内分别进样(n=12)。可待因ECL光强峰日内RSD为2.89%，日间RSD为3.01%;麻黄碱ECL光强峰日内RSD为3.32%，日间RSD为4.22%;马来酸溴苯那敏峰ECL光强峰日内RSD为3.76%，日间RSD为4.73%。表1 复方磷酸可待因溶液中三种化合物的线性范围、回归方程及检测限(略)
2.3.4 空白辅料及其他成分的干扰实验
按处方比例配制除去三种主药以外的空白溶液，用与含量测定项下相同的方法处理样品，得到一空白供试品溶液。在本实验条件下进样，得到该空白供试液电泳图基本为一条无明显峰的直线，说明其他组分都没有电化学发光信号，不干扰三种药物的含量测定医.学全.在.线网站www.med126.com。
配制与处方浓度相当的愈创木酚甘油醚溶液。在本实验条件下进样，得到该溶液电泳图基本为一条无明显峰的直线，说明其没有电化学发光信号，不干扰三种药物的含量测定。
2.4 三种药物发光机理的探讨
体系中存在的三种待测药物具有一定还原性，当对电极施加一个合适的氧化电位时，Ru(bpy)2+3被氧化成为Ru(bpy)3+3，同时三种待测药物也在电极上被氧化，并进一步生成还原型产物。该产物与Ru(bpy)3+3发生氧化还原反应，产生激发态的Ru(bpy)2+3^，Ru(bpy)2+3^返回基态时释放出光子，其氧化还原型电化学发光反应可能机理是(Analyte 表示三种待分析物)：
