公开(公告)号 | CN1490409A |
公开(公告)日 | 2004.04.21 |
申请(专利)号 | CN03150527.9 |
申请日期 | 2003.08.20 |
专利名称 | 重组chBJSTWO蛋白的制备方法及其用途 |
主分类号 | C12N15/09 |
分类号 | C12N15/09;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/00;A61K39/39;A61P37/04;A61P31/12;A61P31/04;A61P33/00 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 浙江大学 |
发明(设计)人 | 周继勇;陈吉刚;王金勇;吴建祥 |
地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
代理人 | 张法高 |
国省代码 | 浙江;33 |
主权项 | 一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法,其特征在于它的步骤如下:1)自中国的仙居鸡、丝羽乌骨鸡和外来品种艾维茵肉鸡的脾淋巴细胞中克隆出chBJSTWO的cDNA与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/His B组建成表达载体pBAD/His B/chBJSTWO;或者上述chBJSTWO cDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαA组建成分泌型表达载体pMETαA/chBJSTWO;或者上述chBJSTWOcDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETA组建成胞内表达型表达载体pMET A/chBJSTWO;2)用RM作为基础培养基,通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194;3)用BMDY作为基础培养基,通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16,在表达不同时间加氮源、碳源等营养素;4)大肠杆菌LMG194和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品,PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中,经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品;用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可得到chBJSTWO纯品;5)粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后,无菌过滤、分装和冻干后制成成品,保存于-20℃的冷藏环境中。 |
摘要 | 本发明公开了一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法及其用途。RT-PCR扩增的不同品系鸡BJSTWO的cDNA片段与原核表达载体pBAD/His B、真核表达载体pMETαA和真核表达载体pMETA构建表达质粒pBAD/His B/chBJSTWO、pMETαA/chBJSTWO和pMETA/chBJSTWO,分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品,PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中,经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品。用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可以较快的得到chBJSTWO纯品,粗制品或纯品可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。本发明具有工艺流程简单,生产成本低,稳定性好,生物学活性高等特点。 |
国际公布 |