| 公开(公告)号 | CN1167798C |
| 公开(公告)日 | 2004.09.22 |
| 申请(专利)号 | CN01125605.2 |
| 申请日期 | 2001.08.10 |
| 专利名称 | 昆虫重组杂交病毒表达载体的构建方法 |
| 主分类号 | C12N15/63 |
| 分类号 | C12N15/63;C12N15/64;C12N15/86;C12N15/09 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 吴小锋 |
| 地址 | 310013 浙江省杭州市西湖区玉古路20号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 林怀禹 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 昆虫重组杂交病毒表达载体的构建方法，其特征在于它包括：1)材料：昆虫培养细胞Sf21和家蚕BmN细胞，AcNPV和BmNPV病毒，Sf21细胞培养基TC-100采用GibcoBRL产品，使用前加入体积比为10％的胎牛血清，Tn-5细胞则使用不含血清的ESF921培养基，采用Expression system公司产品，培养温度均为27℃，家蚕幼虫1-3龄人工饲料育，29℃饲养，4-5龄桑叶育， |
| 摘要 | 一种昆虫重组杂交病毒表达载体的构建方法，利用同源重组的原理，构建了介于AcNPV和BmNPV间的杂交重组病毒表达载体HyNPV。为了减少表达后重组蛋白的降解，利用“基因knock-out”法删除了杆状病毒本身的一种主要蛋白酶-半胱氨酸蛋白酶基因，提高了重组蛋白的稳定性和表达效率。该表达载体较好地解决了BmNPV表达系统寄主范围狭窄及表达后期重组目的产物受蛋白酶降解的问题。它具有寄主范围广，既可感染家蚕，又能感染常用Sf21，Sf9及Tn-5培养细胞；可使用Sf21，Sf9培养细胞代替家蚕细胞加快重组病毒的大量快速制备；由于它对家蚕和常用昆虫培养细胞具有双重感染性，既可利用Sf21，Sf9细胞及大型的Tn-5细胞进行无菌状态下的细胞悬浮培养法快速生产重组蛋白，又可以在家蚕中大量表达，而且重组蛋白生产水平提高50-60％。 |
| 国际公布 |
