| 公开(公告)号 | CN1624122A |
| 公开(公告)日 | 2005.06.08 |
| 申请(专利)号 | CN200410098027.5 |
| 申请日期 | 2004.12.03 |
| 专利名称 | 重组表达的羧肽酶B及其纯化 |
| 主分类号 | C12N9/00 |
| 分类号 | C12N9/00;C12N9/48;C12N15/52;C12N15/57;C12N15/63;C12N11/00;C12N15/81;C12N1/19 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2003.12.5 EP 03028101.8 |
| 申请(专利权)人 | 霍夫曼—拉罗奇有限公司 |
| 发明(设计)人 | S·格拉瑟;F·盖佩尔;T·柯施鲍姆;B·雷克塞尔;J·-P·塔尔霍菲;R·米勒;C·吉塞尔;H·埃克施泰因;E·沃尔夫 |
| 地址 | 瑞士巴塞尔 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 张轶东;刘玥 |
| 国省代码 | 瑞士;CH |
| 主权项 | 一种生产具有羧肽酶B活性的蛋白的方法，包括如下步骤：a)提供一种含有编码由N-末端与组氨酸标记融合的大鼠前羧肽酶B和信号肽构成的前体蛋白的核苷酸序列的载体，由此任选地在组氨酸标记和信号肽之间或在组氨酸标记和大鼠羧肽酶B之间插入一种间隔序列；(b)采用该载体转化一种微生物宿主有机体；(c)在含有营养物和碳源的生长培养基中培养该微生物宿主有机体，其中微生物宿主有机体表达前体蛋白并将组氨酸标记的前羧肽酶B分泌至生长培养基中；(d)把步骤(c)的生长培养基中的分泌的组氨酸标记的前羧肽酶B固定在能结合组氨酸标记的颗粒状的金属螯合物亲和基质上，并冲洗颗粒状的金属螯合物亲和基质，从而将组氨酸标记的前羧肽酶B固定；(e)在一种含有胰蛋白酶的缓冲液中温育步骤(d)中的带有固定化的组氨酸标记的前羧肽酶B的颗粒状的金属螯合物亲和基质，由此通过蛋白水解方式酶切前羧肽酶B部分并将具有羧肽酶B活性的蛋白释放到液相中，由此组氨酸标记的前肽部分被固定；(f)从颗粒状的金属螯合物基质中分离含有具有羧肽酶B活性的蛋白的液相，由此组氨酸标记的前肽部分被固定；和(g)从步骤(f)的液相中纯化具有羧肽酶B活性的蛋白。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种生产来源于非动物宿主有机体的，具有来自前羧肽酶B酶原的羧肽酶B活性的蛋白的制备方法。在非变性条件下，由酶原活化得到羧肽酶B。尤其是，该活化是在避免前肽与活化的羧肽酶B酶的不必要的非共价结合的条件下进行的。 |
| 国际公布 |
